Ultrafast Analysis of a Tricyclic Antidepressant Drug Panel in Human Serum by the Agilent RapidFire High-Throughput Triple Quadrupole Mass Spectrometry System

Význam tématu

Analýza tricyklických antidepresiv v lidském séru je klíčová pro forenzní vyšetření případů řízení pod vlivem, násilných trestných činů, sexuálních útoků nebo neobjasněných úmrtí. Tradiční HPLC a imunoanalytické metody mohou selhávat kvůli případným interferencím, falešně pozitivním výsledkům a křížové reaktivitě, což zvyšuje poptávku po rychlejších a spolehlivějších postupech.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout ultrarychlou, citlivou a přesnou metodu pro simultánní kvantifikaci osmi tricyklických antidepresiv (amitriptylin, nortriptylin, imipramin, desipramin, doxepin, nordoxepin, klomipramin a norklomipramin) v lidském séru. Metoda využívá systém Agilent RapidFire High-Throughput SPE/MS/MS s dobou analýzy 13 sekund na vzorek a kalibračním rozsahem 10–500 ng/mL.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek: 150 µL séra bylo smíseno s 150 µL roztoku 0,2 M ZnSO₄, přidáno 300 µL methanolu s deuterovanými interními standardy, poté vortex, centrifugace a 100 µL supernatantu bylo naředěno v 900 µL LC/MS vody.
Chromatografie: SPE cartridge C18 (RapidFire C18 G9205A), Buffer A (0,1 % kyselina mravenčí ve vodě) 1,5 mL/min, Buffer B/C (0,1 % kyselina mravenčí v methanolu) 1,25 a 0,8 mL/min, injekční objem 10 µL, pět RF stavů (600–7000 ms).
Hmotnostní spektrometrie: Agilent RapidFire 360, Agilent 6460 Triple Quadrupole MS; MassHunter Data Acquisition, Quantitative a RapidFire Software; teplota plynu 300 °C, průtok 10 L/min, stříkající plyn 350 °C při 11 L/min, kapilární napětí 3500 V.
Instrumentace:

• Agilent RapidFire 360
• Agilent 6460 Triple Quadrupole Mass Spectrometer
• MassHunter Acquisition, Quantitative a RapidFire Software

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro všechny analyty vykázaly lineárnost R² > 0,995 v rozsahu 10–500 ng/mL. Mezidení i vnitrodenní přesnost se pohybovala v rámci ±10 %, přesnost (CV) byla < 6 %. Přenos vzorku (carryover) byl < 1 % u všech látek. Při více než 2000 sekvenčních injekcích zůstala variabilita signálu stabilní (CV 2,2–4,2 %). Díky rychlosti 13 s na vzorek systém zpracuje přes 260 vzorků za hodinu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí desetinásobné zrychlení a výraznou úsporu spotřeby rozpouštědel oproti tradičním HPLC a LC/MS/MS protokolům. Je ideální pro rutinní forenzní screening i kvantifikaci tricyklických antidepresiv a lze ji integrovat do QA/QC procesů ve vysokopropustných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit o další skupiny léků a drog, zavést plně automatizované vzorkovací systémy, aplikovat imunoafinitní či online očistné kroky nebo využít pokročilou analýzu dat s podporou umělé inteligence pro rychlou interpretaci výsledků.

Závěr

Ultrarapidní SPE/MS/MS přístup na platformě Agilent RapidFire poskytuje robustní, přesnou a vysoce citlivou alternativu k tradičním LC/MS metodám pro forenzní analýzu tricyklických antidepresiv v lidském séru, a to s výrazným nárůstem propustnosti vzorků.

Reference

1. Titier K. et al. Quantification of Tricyclic Antidepressants and Monoamine Oxidase Inhibitors by High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Whole Blood. Journal of Analytical Toxicology. 31:200–207 (2007).