Small Scale Peptide and Impurity Isolation Using the ACQUITY UPLC H-Class and Waters Fraction Manager-Analytical Systems

Význam tématu

Izolace malého množství peptidů a jejich příměsí umožňuje rychlou optimalizaci syntetických a štěpných procesů a poskytuje cenné informace o kvalitě a výtěžku cílového produktu.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje využití systému ACQUITY UPLC H-Class ve spojení s Waters Fraction Manager-Analytical pro efektivní izolaci syntetického peptidu a jeho těsně elujících příměsí na malém měřítku.

Použitá metodika a instrumentace

• Systém ACQUITY UPLC H-Class s PDA detektorem a Waters Fraction Manager-Analytical
• Software Empower 3
• Kolona XBridge Peptide BEH C18 (4,6×50 mm, 5 μm), teplota 30 °C, průtok 1,46 ml/min
• Mobilní fáze A: 0,1 % TFA ve vodě, B: 0,1 % TFA v acetonitrilu
• Gradienty: zaměřený 28–32 % B v 5 minut, analytické 5–50 % B v 5 minut a 28–32 % B v 5 minut
• Přetížení vzorku: krystalický peptid 2,4 mg ve DMSO, filtrace 0,45 μm špirálou

Hlavní výsledky a diskuse

• Geometrické škálování z 100 mm na 50 mm kolonu zkrátilo dobu analýzy z 18 na 9 minut a snížilo objem injekce z 10 na 5 μl
• Opakovatelnost chromatografie prokázána překrývajícími se pěti injekcemi s identickými profily
• Fraction Manager-Analytical minimalizuje disperzi špiček a umožňuje sběr úzkých, koncentrovaných frakcí s vysokou výtěžností
• V deseti injekcích byla izolována tři hlavní sloučeniny a dosaženo konzistentních objemů frakcí (0,29–0,55 ml)
• Čistota peptidu po přečištění 100 %, příměsi vykázaly 83 % a 98 % podle rychlého gradientu, a 77 % a 80 % podle mělkého gradientu

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá separace malých dávek peptidů a jejich příměsí
• Úspora vzorku, rozpouštědla i času
• Podpora rozhodování ve vývojových a výzkumných pracích
• Univerzální použití v syntéze, metabolizmu i přírodních produktech

Budoucí trendy a možnosti využití

• Adaptace na jiné biologicky aktivní molekuly a komplexní směsi
• Integrace s hmotnostní spektrometrií a dalšími detekčními technikami
• Vylepšení systémové disperze a plná automatizace frakcí
• Vývoj vyššího rozlišení a menších měrných dávek

Závěr

Konfigurace ACQUITY UPLC H-Class s Waters Fraction Manager-Analytical poskytuje přesnou, reprodukovatelnou a úspornou metodu pro malé měřítko izolace peptidů a zajišťuje vysokou čistotu produktů.

Reference

1. Uhlig T, Kyprianou T, Martinelli FG, Oppici CA, Heiligers D, Hills D, Calvo XR, Verhaert P. The emergence of peptides in the pharmaceutical business: From exploration to exploitation. EuPA OPEN PROTEOMICS 4 (2014) 58–69.
2. Aubin A, Jablonski J. Prep 150 LC System: Considerations for Analytical to Preparative Scaling. Waters Application Note 720005458EN. July 2015.
3. Jablonski J, Aubin A. Peptide Isolation Using the Prep 150 LC System. Waters Application Note 720005455EN. July 2015.
4. Jablonski J, Wheat T, Diehl D. Developing Focused Gradients for Isolation and Purification. Waters Technical Note 720002955EN. September 2009.
5. Optimized System Dispersion for UPLC Performance in a Versatile LC Design. Waters Technology Brief 720003651EN. July 2010.
6. Exact Control of Solvent Composition with the ACQUITY UPLC H-Class Quaternary Solvent Manager. Waters Technology Brief 720004405EN. July 2012.
7. Delivering Repeatable, Linear, and Accurate Injection Volumes for UPLC and HPLC. Waters Technology Brief 720003445EN. April 2010.