Quantitative Analysis of THC and Metabolites in Urine With a Simple, Fast, and Clean Oasis PRiME HLB μElution Plate

Význam tématu

Quantitativní stanovení Δ9-tetrahydrokanabinolu (THC) a jeho metabolitů v moči je klíčové pro forenzní toxikologii, monitorování užívání návykových látek a kontrolu dodržování předpisů. Rychlá a spolehlivá příprava vzorků minimalizuje riziko kontaminace, snižuje časové a materiální nároky laboratoře a zajišťuje konzistentní výsledky.

Cíle a přehled studie / článku

Tato studie popisuje vývoj a validaci metody extrakce THC, THC-OH a THC-COOH z lidské moči pomocí Oasis PRiME HLB µElution 96-jamkové destičky a následnou analýzu pomocí UPLC-MS/MS. Hlavním cílem bylo zjednodušit workflow, dosáhnout vysoké reprodukovatelnosti, lineárních kalibrací a nízkých mezí kvantifikace.

Použitá metodika a instrumentace

• Hydrolýza: β-glukuronidáza (E. coli K12) při 37 °C po dobu 16 hodin, následná alkalická hydrolýza při 70 °C.
• Oasis PRiME HLB µElution destička: přímé nanesení 500 µL vzorku, promytí 2 × 300 µL 25 % methanolu, eluční činidlo 2 × 25 µL 60:40 ACN:IPA, rozředění vodou.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC BEH C18 kolona (1.7 µm, 2.1 × 50 mm), gradientní eluce voda/ACN s 0.1 % formovou kyselinou, 5 µL injekce, doba analýzy 4 min.
• MS/MS: Xevo TQ-S, ESI pozitivní mód, optimalizovaná napětí a energie pro jednotlivé přechody MRM.

Použitá instrumentace

• Oasis PRiME HLB 96-well µElution Plate (p/n 186008052)
• ACQUITY UPLC I-Class System
• ACQUITY UPLC BEH C18 Column, 130 Å, 1.7 µm, 2.1 × 50 mm
• Waters Xevo TQ-S Mass Spectrometer

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla chromatografického rozlišení tří kanabinoidů během 3 minut s šířkami vrcholů pod 3 s. Průměrná výtěžnost byla ~91 % pro THC-OH a THC-COOH (RSD < 5 %) a ~61 % pro THC (RSD < 8 %). Matrixové efekty byly nižší než 15 % se standardními odchylkami ≤ 4,5 %. Kalibrace byly lineární v rozsahu 0,1–100 ng/mL (THC-OH, THC-COOH) a 0,2–100 ng/mL (THC) s R2 ≥ 0,997 a meze kvantifikace 0,1–0,2 ng/mL. QC vzorky prokázaly přesnost 88–101 % a RSD < 2 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Zrychlená a standardizovaná příprava bez kondicionace a reekvilibrace SPE sorbentu.
• Eliminace kroků odpařování a rekonstituce, minimalizace ztrát analytů.
• Čisté extrakty s nízkými matrixovými efekty prodlužují životnost kolony a MS zdroje.
• Vysoká přesnost, preciznost a nízké meze rozlišení vhodné pro forenzní a klinickou toxikologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí vývoj se zaměří na plnou automatizaci přípravy vzorků, integraci do high-throughput platforem a rozšíření na další metabolity a matice (krev, sérum). Další miniaturizace a on-line SPE-UPLC-MS/MS mohou zvýšit efektivitu a propustnost laboratoří.

Závěr

Oasis PRiME HLB µElution výrazně zjednodušuje a zrychluje extrakci THC a jeho metabolitů z moči při zachování vysoké výtěžnosti, čistoty extraktů a analytické robustnosti. Metoda splňuje požadavky na validaci dle FDA a je vhodná pro forenzní i klinické aplikace.

Reference

• Lee R., Traynor A., LeCount J., Wood M. Quantitative analysis of 11-nor-carboxy Δ9-THC in urine using UPLC-MS/MS. Waters Application Note 720004808EN (2012).
• Bansal S., DeStefano A. Key elements of bioanalytical method validation for small molecules. The AAPS Journal 9(1): E109–E114 (2007).