Quantitative Analysis of THC and its Metabolites in Plasma Using Oasis PRiME HLB for Toxicology and Forensic Laboratories

Význam tématu

Analýza THC a jeho metabolitů v plazmě je klíčová pro forenzní a toxikologické laboratoře, které často řeší případy spojené s konzumací konopí. Plasma je preferovaná nad celou krví pro konzistentnější poměry koncentrací, zejména COOH-THC. Rychlé a spolehlivé stanovení Δ9-THC, THC-OH a THC-COOH podporuje vyšetřování dopravních nehod, farmakokinetické studie i klinické hodnocení.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace je předvést efektivní extrakci a kvantifikaci THC a dvou hlavních metabolitů z plazmy pomocí nové sorbentové destičky Oasis PRiME HLB v µElution formátu a následné rychlé UPLC MS MS analýzy. Metoda usiluje o zjednodušení workflow, odstranění kroků kondicionování, eliminaci odpařování a reconstituci a dosažení konzistentních výtěžností a nízkých matričních efektů.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek plazmy byl homogenizován přidáním kyseliny ve formiátové vodě v ACN a odstředěn pro proteiny. Supernatant se ředil vodou a aplikoval na Oasis PRiME HLB µElution Plate bez kondicionování. Následovalo promytí 25 75 MeOH voda a eluace 90 10 ACN MeOH. Vzorky se pouze naředily vodou a injektovalo se 5 µl.
Instrumentace:

• ACQUITY UPLC I Class se sloupcem BEH C18 1 7 µm 2 1 x 50 mm 40 °C mobilní fáze voda s 0 1 % kys formiové (MPA) a ACN s 0 1 % kys formiové (MPB)
• Xevo TQ S Mass Spectrometer v ESI pozitivním režimu s MassLynx a TargetLynX

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza prokázala rychlou separaci všech tří sloučenin do 3 minut s šířkou píků pod 3 sekundy. Výtěžnosti byly nad 75 % s RSD pod 6 % a matriční efekty nižší než 20 % (SD <3 %). Linearita 0 1 až 100 ng ml s r2 > 0 99 při 1 x vážení LLOQ 0 1 ng ml QC vzorky ve čtyřech úrovních vykázaly přesnost do 10 % a RSD 2 5 %. Fosfolipidy byly odstraněny z více než 99 %, což redukuje riziko iontového potlačení a prodlužuje životnost kolony i MS zdroje.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Zjednodušený a zrychlený workflow bez kondicionování a reconstituce
• Minimální manipulaci se vzorkem a redukci nespecifického vázání
• Čisté eluáty s nízkými matričními interferencemi
• Vysokou přesnost, preciznost a reprodukovatelnost

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření využití Oasis PRiME HLB pro stanovení dalších strukturálně příbuzných látek integrace automatizovaných přípravných linek a multiplexní analýzy v rámci high throughput forenzního screeningu. Dalším trendem je kombinace s novými detektory a adaptace na farmakokinetické studie nových kanabinoidů.

Závěr

Popsaná metoda spojuje jednoduchou a rychlou extrakci s vysoce efektivní UPLC MS MS analýzou přináší vysoké a konzistentní výtěžnosti nízké matriční efekty a odstraňování fosfolipidů. To zajišťuje spolehlivé kvantitativní výsledky pro forenzní a klinickou praxi.

Reference

• Farrell LJ Kerrigan S Logan BK Recommendations for Toxicological Investigation of Drug Impaired Driving Journal of Forensic Sciences 52 5 1214–1218 2007
• Elian AA Hackett J Solid Phase Extraction and Analysis of THC and Carboxy THC from Whole Blood Using a Novel Fluorinated Solid Phase Extraction Sorbent and Fast Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Journal of Analytical Toxicology 33 8 461–468 2009
• Schwilke EW Karschner EL Lowe RH Intra and Intersubject Whole Blood Plasma Cannabinoid Ratios Determined by 2 Dimensional Electron Impact GC MS with Cryofocusing Clinical Chemistry 55 6 1188–1195 2009
• Lee D Bergamaschi MM Milman G Plasma Cannabinoid Pharmacokinetics After Controlled Smoking and Ad libitum Cannabis Smoking in Chronic Frequent Users Journal of Analytical Toxicology 39 8 580–587 2015
• Milman G Bergamaschi MM Lee D Plasma Cannabinoid Concentrations during Dronabinol Pharmacotherapy for Cannabis Dependence Therapeutic Drug Monitoring 36 2 218–224 2014
• Huestis MA Henningfield JE Cone EJ Blood Cannabinoids I Absorption of THC and Formation of 11 OH THC and THCCOOH During and After Smoking Marijuana Journal of Analytical Toxicology 16 5 276–282 1992