Improved Extraction of THC and its Metabolites from Oral Fluid Using Oasis PRiME HLB Solid Phase Extraction (SPE) and a UPLC CORTECS C18 Column

Význam tématu

Cannabis patří mezi nejrozšířeněji zneužívané drogy a jeho legalizace pro lékařské i rekreační účely zvyšuje potřebu spolehlivých analytických metod. Orální tekutina nabízí neinvazivní sběr a lepší korelaci s aktuálním stavem intoxikace než moč.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie je představit zjednodušenou, ale spolehlivou proceduru extrakce THC a jeho hlavních metabolitů (11-OH-THC, THC-COOH) z orální tekutiny za použití Oasis PRiME HLB µElution Plate a následnou rychlou analýzu UPLC–MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

• SPE: Oasis PRiME HLB µElution Plate bez kondicionování či ekvilibrace, eluce 2×25 µL 90:10 ACN:MeOH.
• UPLC: ACQUITY I-Class se sloupcem CORTECS UPLC C18 (1.6 µm, 2.1×100 mm), gradientní běh 6 min, teplota kolony 40 °C, injekční objem 5 µL.
• MS/MS: Xevo TQ-S v pozitivním režimu ESI, optimalizované MRM přechody pro analyty i izotopní interní standardy.
• Sběr vzorků: Quantisal kit s 3 mL stabilizačního pufru, přídavek 1 mL ACN a overnight equilibration.

Hlavní výsledky a diskuse

• Extrahované výtěžnosti >75 % s RSD <6 % pro všechny sloučeniny.
• Minimalizovaný matrixový efekt <10 % po optimalizaci wash kroku s 5 % NH4OH.
• Kalibrační křivky lineární v rozsahu 0,05–100 ng/mL (R2 >0,999) s LLOQ 0,1 ng/mL (THC-OH/COOH) a 0,05 ng/mL (THC).
• Rychlá chromatografie – eluce všech analytů do 3 min s úzkými píky (<1,8 s na 5 % výšky).
• QC vzorky v rozmezí ±10 % přesnosti a RSD <3 %, splňující doporučení FDA.

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácená a jednoduchá příprava vzorku bez odpařování a rekonstituce.
• Možnost přímé injekce eluátu z µElution formátu.
• Vysoká citlivost pod rozhodovacím limitem 2 ng/mL pro THC.
• Vhodné pro soudní toxikologii, drogovou kontrolu a dopravní testování.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další drogové panely a matice.
• Automatizace a zvýšení throughputu v klinických a forenzních laboratořích.
• Integrace s přenosnými detekčními zařízeními pro field-testing.
• Miniaturizace a využití mikrofluidických platforem pro snížení spotřeby vzorku.

Závěr

Metoda s Oasis PRiME HLB µElution Plate a UPLC–MS/MS dosahuje vysoké reprodukovatelnosti, citlivosti a rychlosti analýzy THC a jeho metabolitů v orální tekutině s minimálními matrixovými efekty.

Reference

• Huestis MA, Henningfield JE, Cone EJ. Blood Cannabinoids. I. Absorption of THC and Formation of 11-OH-THC and THCCOOH During and After Smoking Marijuana. J Anal Toxicol. 1992;16(5):276–282.
• Kintz P, Cirimele V, Luders B. Detection of Cannabis in Oral Fluid (Saliva) and Forehead Wipes (Sweat) from Impaired Drivers. J Anal Toxicol. 2000;24:557–561.
• Niedbala RS, Kardos KW, Fritch DF, Kardos S, Fries R, Waga J. Journal of Analytical Toxicology. 2001;25:289–303.
• Bansal S, DeStefano A. Key elements of bioanalytical method validation for small molecules. AAPS J. 2007;9(1):E109–E114.
• Chi E, Cole J. Using an MRM method on a GC-triple quadrupole MS to confirm and quantitate THC in oral fluid is an effective alternative to blood and urine sample. Forensic Magazine. 2010;Nov:17–21.