The Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS: Peptide Quantitation Performance

Význam tématu

Analytická kvantifikace peptidů v biologických vzorcích je klíčová pro ověřování biomarkerů a klinické proteomiky. Nízké koncentrace cílových peptidů a složitost matric vyžadují vysoce citlivé a reprodukovatelné metody založené na MRM

Cíle a přehled studie / článku

Popis výkonu Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS pro kvantifikaci peptidů s využitím syntetického standardu LVNEVTEFAK v režimech standardního a nanoflow. Hodnocena byla citlivost, dynamický rozsah, robustnost a praktická kvantitativní přesnost na reálných vzorcích i v rámci soutěže MRM Protein Quantitation 2014

Použitá metodika a instrumentace

Pro standardní flow:

• Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS se dual-stage iFunnel technologií a Agilent Jet Stream ionizací
• Agilent 1290 Infinity Binary LC systém
• Kolona ZORBAX RRHD 300SB-C18, 2.1×50 mm, 1.8 µm

Pro nanoflow:

• Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS s 1260 Infinity HPLC-Chip/MS systémem
• Polaris-HR-Chip-3C18, 20min běh v MRM/DMRM režimu

Zpracování vzorků zahrnovalo trypsinovou digestaci, MRM analýzu a vyhodnocení pomocí MassHunter WorkStation

Hlavní výsledky a diskuse

Systém dosáhl LLOQ 5 amol (standard) a 500 zmol (nano) s lineárním rozsahem 5 amol–5 pmol (R²=0.998) a 500 zmol–100 fmol (R²=0.99996). Retenční časy byly vysoce reprodukovatelné (RSD <0.2 % standard, <1.4 % nano). Plošné integrály měly nízkou variabilitu. Robustnost prokázána 853 injekcemi plasmatického digestu bez čištění nebo ladění (RSD 6–15 %). V soutěži MRM quantitation systém dosáhl průměrné přesnosti 95.3 % ve standard flow a 93.9 % v nanoflow

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivou analýzu nízkokoncentrovaných peptidů v biologických matricích. Díky vysoké citlivosti a robustnosti podporuje vysokopropustné studie biomarkerů, klinický výzkum, QA/QC a průmyslovou analytiku

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj micro- a nanoflow technologií, širší nasazení HPLC-Chip systémů, integrace stabilně izotopových standardů s automatizovanou přípravou vzorků a využití pokročilé datové analýzy včetně umělé inteligence pro zpracování masivních objemů dat

Závěr

Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS nabízí bezkonkurenční kombinaci citlivosti, lineárního rozsahu, reprodukovatelnosti a robustnosti pro kvantifikaci peptidů v biologických vzorcích. Metoda je vhodná pro translaci výzkumu, klinické studie i rutinní průmyslovou analytiku

Reference

• Agilent Technologies. Technical Overview: Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS – Peptide Quantitation Performance. USA, 2016, 5991-6898EN
• Proceedings of Mikromethoden in der Proteinchemie Meeting, 2014
• University of Victoria – Genome BC Proteomics Centre. MRM Protein Quantitation Contest, 2014