Queued and Ready to Run? Testing the Stability of Vitamin Extracts While in Queue Using Triple Quadrupole LC/MS/MS Analysis

Význam tématu

Spolehlivá analýza vodou rozpustných vitaminů je klíčová pro zajištění kvality a správného označení doplňků stravy. Vitaminové molekuly jsou náchylné k degradaci způsobené světlem, teplem, oxidací a interakcemi s formulací. Popsaná studie hodnotí stabilitu osmi vodou rozpustných vitaminů během 12hodinového čekání ve vychlazeném autosampleru.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo stanovit pokles signálu každého z vitaminů (biotin, cholin, folát, niacinamid, pantothenát, pyridoxin, riboflavin, thiamin) v průběhu 0–12 hodin po přípravě extraktu. Studie využívá kvadrupólové LC/MS/MS pro současnou a citlivou detekci všech složek.

Použitá metodika

Všechny standardy i extrakty z prenatálních kapslí byly připraveny najednou a uchovávány v autosampleru při 4 °C. V definovaných časových bodech (0, 6, 12 h) byla do vzorků přidána vnitřní standardní směs 13C3,15N D-kyseliny pantothenové pro korekci případné ztráty signálu. Extrakční postup zahrnoval mletí tablet, přidání směsi vody/acetonitrilu/kyseliny octové (94/5/1), vortex, sonikaci, odstředění a filtraci.

Použitá instrumentace

• LC/MS/MS: Shimadzu LCMS-8040
• Kolona: Shim-pack XR-ODS-II C18 (100 × 2,0 mm) při 40 °C
• Mobilní fáze A: 5 mM amonný formiát, 0,1 % kyseliny formiové ve vodě
• Mobilní fáze B: acetonitril s gradientním programem 0–40 % B během 7 min
• Detekce režim MRM s optimalizovanými přechody pro každý vitamin
• Podmínky zdroje: suchý plyn 10 L/min, nebulizační plyn 1,5 L/min, teplota DL 250 °C, teplota topného bloku 400 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky všech vitaminů prokázaly výbornou linearitu (R2 > 0,99) v rozsahu od 2 ng/mL až po 20 mg/mL. V průběhu 6 hodin klesl signál analyzátů v průměru o 2,5–17,3 % a po 12 hodinách o 5,7–32,9 %. Nejsilnější degradaci vykázal thiamin (-32,9 %) a folát (-20,3 %), zatímco riboflavin klesl jen o ~9,8 %. Chromatogramy ukazují postupný úbytek špiček napříč časovými body.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a specifické stanovení více vitaminů v jednom běhu
• Snížení nároků na stabilizační činidla a složité extrakční postupy
• Vhodné pro rutinní QA/QC v potravinářském a farmaceutickém průmyslu
• Možnost detekce nežádoucích degradantů a nečistot

Budoucí trendy a možnosti využití

• Nasazení UHPLC pro zkrácení doby analýzy a minimalizaci doby držení vzorku
• Online připojení ultrarychlého MS k extrakčnímu modulu
• Automatizace přípravy a řízení teploty pro další snížení variability
• Rozšíření aplikace na další citlivé biomolekuly

Závěr

Studie potvrdila, že vodou rozpustné vitaminy v extraktech významně degradují už během 12 hodin při 4 °C. Pro spolehlivou kvantifikaci je nezbytné minimalizovat čas od přípravy po injekci, ideálně pomocí rychlé UHPLC-MS/MS a optimalizovaného pracovního toku.

Reference

• Post J., Leonard S., Gilles C., Kuzdzal S. Queued and Ready to Run? Testing the Stability of Vitamin Extracts While in Queue Using Triple Quadrupole LC/MS/MS Analysis. ASMS 2013 WP-332.