Using UPLC-MS/MS for the Quantitation of Illicit or Prescription Drugs in Preserved Oral Fluid

Význam tématu

Moderní forenzní toxikologie klade důraz na rychlou a spolehlivou detekci nepovolených i předepisovaných látek. Ústní tekutina se stává preferovanou matricí díky neinvazivnímu odběru, snadné kontrole integrity vzorku a lepší vazbě na aktuální stav intoxikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit kvantitativní UPLC-MS/MS metodu pro stanovení 14 látek v uchované ústní tekutině. Důraz byl kladen na vysokou citlivost, přesnost a robustnost vhodnou pro rutinní pracovní i silniční drogové testování.

Použitá metodika a instrumentace

• Odběr vzorku: Quantisal Oral Fluid Collection Device s konzervačním pufrem, uchování při 4 °C po 24 hodin.
• Příprava vzorku: přídavek deuterovaných vnitřních standardů, kyselina fosforečná, SPE s Oasis MCX µElution deskou, praní formou praní formou formy, eluce v roztoku acetonitril/propan-2-ol s amoniakem, sušení dusíkem, rekonstituce ve vodě/acetonitrilu.
• Chromatografie: Waters ACQUITY UPLC I-Class se sloupcem BEH C18 (2,1×100 mm, 1,7 µm), gradientní eluce fází A (0,1 % kyselina mravenčí) a fází B (acetonitril), 0,4 ml/min, doba běhu 7 minut, teplota kolony 40 °C.
• Hmotnostní spektrometrie: Xevo TQD, pozitivní ESI, optimalizované MRM přechody a napětí pro každý analyzát.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity s koeficientem determinace >0,995 v rozmezí 0-500 ng/ml.
• Detekční limity LOD pod 0,1 ng/ml, kvantifikační LLOQ 0,16–4,0 ng/ml.
• Interdenní přesnost a opakovatelnost: RSD <10 %, odchylky <15 % cílových hodnot.
• Extraktační výtěžnost a matrixové efekty kompenzovány deuterovanými standardy, matrice variabilita <25 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje vysokou propustnost vzorků, nízké detekční limity a splňuje kritéria potvrzovacích testů v pracovních i silničních programech. Jednoduchá příprava vzorku a krátký doba analýzy podporují rutinní provoz v forenzních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace odběru a přípravy vzorku pro zvýšení kapacity analýz.
• Rozšíření panelu o nové designérové drogy a jejich metabolity.
• Nasazení vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro screening neznámých sloučenin v reálném čase.

Závěr

Navržená UPLC-MS/MS metoda pro uchovanou ústní tekutinu dosahuje požadované citlivosti, přesnosti a robustnosti. Jednoduchá SPE příprava a citlivá detekce umožňují spolehlivou kvantifikaci na úrovni potřebných cut-off hodnot.

Reference

• Evropská společnost pro pracovní drogové testování. Doporučení pro analýzu drog v biologických matricích.
• Danaceau et al. Direct analysis of opioids and metabolites in oral fluid by mixed-mode µElution SPE combined with UPLC-MS/MS for forensic toxicology. Waters Application Note, 2013.