An Integrated LC-MS Workflow with ProMass HR for Synthetic Peptide Impurity Analysis

Význam tématu

Analýza nečistot syntetických peptidů je klíčová pro zajištění kvality a účinnosti terapeutických látek, zejména v kontextu personalizovaných vakcín a biologických léčiv. Přesné profilování nečistot minimalizuje riziko snížené aktivity nebo imunogenních vedlejších účinků.

Cíle a přehled studie

Cílem práce je demonstrovat integrované LC-MS workflow s použitím softwaru MassLynx a ProMass HR pro hromadnou a vysoce přesnou charakterizaci nečistot modelového peptidu eledoisinu. Studie ukazuje kompletní postup od separace až po automatizované zpracování dat.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci a detekci byly využity tyto přístroje a metody:

• ULPC systém ACQUITY UPLC H-Class Bio s TUV detektorem
• MS detektor Waters Xevo G2-XS QTof
• Gradientní eluce 20 minut, 18–28 % acetonitrilu s 0,1 % kyseliny mravenčí, teplota 60 °C
• Softwarové zpracování v MassLynx s pluginem ProMass HR: zadání cílové sekvence, definice parametrů dekonvoluce (univerzální PPL metoda), filtrace šumu a deisotopizace

Hlavní výsledky a diskuse

Experimentální separace umožnila rozlišení hlavního vrcholu eledoisinu od šesti vedlejších nečistot. Dekonvoluce MS dat pomocí ProMass HR dosáhla přesnosti hmotnostního určení cílového peptidu 2,4 ppm. Software generuje detailní reporty, které zahrnují:

• Tabulku shrnující vypočtenou a naměřenou hmotnost
• Hodnocení čistoty z LC a MS pohledu
• Propojení na ESI a dekonvoluovaná spektra
• Sekvenční “ladders” pro identifikaci zkrácených úseků a modifikací

Výsledky potvrzují robustnost workflow pro rychlou a spolehlivou analýzu komplexních vzorků peptidů.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení propustnosti vzorků díky automatizovanému zpracování
• Vysoká přesnost a reprodukovatelnost hmotnostních měření
• Kvantitativní i kvalitativní sledování většího množství nečistot
• Uplatnění v preklinickém i výrobním stádiu farmaceutického vývoje

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření workflow o:

• Integraci s platformami pro řízení laboratorních dat (LIMS) a UNIFI
• Využití strojového učení pro automatickou interpretaci spekter
• Adaptaci na jiné třídy biomolekul (oligonukleotidy, sacharidy)
• Zavedení cloudového zpracování pro vzdálený přístup a sdílení výsledků

Závěr

Popsané LC-UV/HRMS workflow s použitím MassLynx a ProMass HR představuje efektivní a vysoce přesnou metodu pro impurity profiling syntetických peptidů. Díky automa­tizovanému zpracování a detailním reportům podporuje rychlejší a důvěryhodnější rozhodování v rámci vývoje biologických léčiv.

Reference

• Ott P. A. et al. An Immunogenic Personal Neoantigen Vaccine for Patients with Melanoma. Nature, 2017. doi:10.1038/nature22991.
• Shion H. et al. Developing a Novel, Integrated LC-MS Workflow for High-Resolution Monitoring and Characterization of Oligonucleotides. 720005821EN, Nov 2016.
• Zhang X. et al. LC-UV-MS-based Synthetic Peptide Identification and Impurity Profiling Using the ACQUITY QDa Detector with ProMass Software. 720005921EN, Feb 2017.