GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Reagent Kits: Scalable Solutions for Low- to High-throughput N-Glycan Sample Preparation Using Manual, Semi-automated or Fully Automated Workflows

Význam tématu

Analýza N-glykanů je klíčová pro charakterizaci glykoproteinů v biotechnologii a farmaceutickém výzkumu. Efektivní příprava vzorků s flexibilní průchodností od nízkého po vysoký počet vzorků zvyšuje produktivitu laboratoře, snižuje chyby a zajišťuje konzistentní výsledky ve fluorescenční i hmotnostní detekci.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat škálovatelnost GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Kitů pro manuální, semi-automatizované i plně automatizované workflow. Testován byl manuální postup, semi-automatizace na platformě Andrew Alliance a plná automatizace na Tecan.

Použitá metodika a instrumentace

• LC podmínky: ACQUITY UPLC I-Class/H-Class Bio s FLR detektorem, kolona Glycan BEH Amide 2.1×150 mm, 1.7 µm, teplota 60 °C, detekce Ex 265 nm/Em 425 nm.
• Mobilní fáze: A – 50 mM amonný formiát pH 4.4, B – acetonitril.
• Příprava vzorků: manuálně podle návodu (Waters 715004793EN), semi-automatizace s Andrew Alliance (720006197EN), plná automatizace s Tecan (715005359EN), použit RapiFluor-MS test standard a intact mAb standard.
• Software: Empower 3 CDS.

Hlavní výsledky a diskuse

• Všechny metody dosáhly vysoké preciznosti s %CV < 2 % u vybraných N-glykanů (G0F, G1Fa, G1Fb, G2F).
• Srovnání metod ukázalo velmi nízký bias vůči manuální přípravě, v 95 % intervalech spolehlivosti menších než ±1.4 %.
• Minimální a maximální hodnoty oblasti glykanů byly v úzkých rozmezích napříč pracovními postupy.
• Statistické testy potvrdily, že i přes vysokou preciznost je rozdíl mezi metodami limitován variabilitou dat.

Přínosy a praktické využití metody

• Modulární sada kitů umožňuje volbu workflow podle počtu vzorků a dostupnosti automatizace.
• Plná automatizace zvyšuje propustnost a minimalizuje manuální chyby.
• Standardizované skripty (Tecan, Andrew Alliance) zkracují čas adaptace a validace postupů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s dalšími automatizovanými platformami pro různé výrobce liquid handlingu.
• Rozšíření protokolů pro nové typy glykoproteinových vzorků a multi-omics aplikace.
• Využití kompletní automatizace v GMP prostředí pro hloubkovou kontrolu kvality bioterapeutik.

Závěr

GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Kits prokazují robustní a vysoce precizní přípravu N-glykanů v manuálním, semi-automatizovaném i plně automatizovaném režimu. Díky validovaným skriptům a kompatibilitě s hlavními platformami lze workflow snadno škálovat a standardizovat.

Reference

Lambert P., Cullen D., Reed C., Koza S., Lauber M., Fournier J., Davey L. GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Reagent Kits: Scalable Solutions for Low- to High-throughput N-Glycan Sample Preparation. Waters Corporation; 2018.