GlycoWorks™ RapiFluor-MS™ N-Glycan Kits with the Andrew Pipetting Robot

Význam tématu

Analýza N-glykanů hraje klíčovou roli v biologické a farmaceutické analytice, protože struktura a kvantita glykosilace ovlivňují funkci a stabilitu glykoproteinů. Automatizace přípravy vzorků pomocí robotických pipetovacích systémů zvyšuje reprodukovatelnost, snižuje riziko lidské chyby a zkracuje čas do výsledků, což je zásadní pro rutinní QC a výzkumné aplikace.

Cíle a přehled studie / článku

Manuál popisuje kompletní workflow pro použití platformy Andrew Alliance v kombinaci s Waters GlycoWorks™ RapiFluor-MS™ N-Glycan Kits. Cílem je zajistit spolehlivé uvolnění, značení, čištění a přípravu N-glykanů pro následnou fluorescenční a hmotnostní detekci s optimalizovanými objemy, časy a sadou kontrolních kroků (IQ/OQ).

Použitá metodika a instrumentace

Robot Andrew Alliance s výměnnými Dominos™ pro pipetovací kanály (P20, P200, P1000) a reagenty, Peltierovo modul pro řízenou teplotu 1,2 mL reakcí, vakuový manifold Domino™ pro SPE a odolný vakuový pumpovací modul. Software Andrew Lab řídí protokoly (QC 24 a QC 96) včetně volitelných normalizačních kroků.

Hlavní výsledky a diskuse

Implementace automatizované metody pro 8–24 až 24–96 vzorků současně prokázala:

• Konzistentní objemy pipetování při varování na dolní a horní mrtvý objem.
• Reprodukovatelné uvolnění N-glykanů pomocí RapiFluor a rychlého enzymatického štěpení.
• Efektivní SPE čistění a eluci glykanů se zajištěnou čistotou pro UPLC-MS analýzu.

Přínosy a praktické využití metody

Systém umožňuje vysokou propustnost vzorků s minimální manuální manipulací. Pro QC laboratoře a výzkumné skupiny je přínosem standardizovaný postup, zkrácení doby přípravy a možnost integrace do stávajících LIMS prostředí.

Použitá instrumentace

• Andrew Alliance Pipetting Robot (model 1000G-XL/1000R-XL) s kanály P20, P200, P1000.
• Peltier Domino™ (200.799/1, 200.938/2) pro 1,2 mL trubice.
• Waters Vacuum manifold Domino™ (200.978/1) s μElution™ 96-well destičkou.
• Vacuum pumpa (Waters 725000604/725000417) a Power Switch module (205.114/1).
• Domino™ pro Rack 600 µL mikrotrubic.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření integrace s online UPLC-MS systémy, použití inteligentních skriptů pro adaptivní normalizaci koncentrace vzorku, dále rozvoj modulárních revolverů pro více typů čistících koncepcí (hydrofilní interakce, iontová výměna) a využití strojového učení pro optimalizaci protokolů.

Závěr

Popisovaná automatizovaná platforma efektivně zrychluje a standardizuje přípravu N-glykanů pro fluorescenční a hmotnostní detekci. Metoda splňuje požadavky vysoce přesné QC analýzy a nabízí flexibilitu pro různé typy glykoproteinů.

Reference

• GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Kit – 96 Sample Care and Use Manual (715004793EN).
• GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Kit – 24 Sample Care and Use Manual (715004903).
• Quality Control and Automation Friendly GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan Sample Preparation (720005506EN).
• Andrew Lab User Guide, Andrew Robot User Guide.