Máte zájem pracovat pro jednoho z největších výrobců chromatografického materiálu?
Chromatografická řešení společnosti Phenomenex posouvají vědu a pomáhají výzkumníkům zlepšovat zdraví a životní prostředí na celém světě - od objevování léků a farmaceutického vývoje přes diagnostiku nemocí až po analýzu bezpečnosti potravin a životního prostředí.
Společnost Phenomenex je hrdou součástí společnosti Danaher.
Vedoucí postavení společnosti Danaher v oblasti vědy a technologií staví řešení společnosti Phenomenex na špičku v oboru a dostávají se tak k více lidem. Být součástí společnosti Danaher znamená, že můžeme našim zákazníkům nabídnout bezkonkurenční šíři a hloubku odborných znalostí a řešení.
Společně s dalšími společnostmi Danaher v oblasti biotechnologie, diagnostiky a life sciences posouváme transformační potenciál vědy a technologií, které každý den zlepšují životy miliard lidí.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Big_Moments_in_Phenomenex_History_f6eac01220/Phenomenex-Big-Moments-in-Phenomenex-History.jpg" alt="Phenomenex: Velké okamžiky v historii společnosti Phenomenex"/>
Do you want to work in Technical Sales? Do you enjoy enjoy speaking to customers, learning about their work and supporting them to get the best results?
<h3>Technical Sales Consultant (d/f/m)</h3>
We are currently seeking for a Technical Sales Consultant (d/f/m) - Remote based who will be responsible for implementing a sales strategy that will facilitate meeting and exceeding sales, gross profit and unit goals, whilst also providing service and technical support to customers on a regular and ongoing basis.
<blockquote>
👉 <a href="https://danaher.wd1.myworkdayjobs.com/PhenomenexJobs/job/Prague-Czechia/Technical-Sales-Consultant--d-f-m-_R1258001">Apply for a job</a>
</blockquote>
<h5>What we’ll get you doing:</h5>
<ul>
<li>Managing your assigned territory as if it were your own business, selling Chromatography consumables, and providing Technical Support, Customer Service and Troubleshooting to your customer base
</li>
<li>Developing relationships with new and existing customers through face to face meetings, as well as originating communication via phone and email
</li>
<li>Developing business plans, market analysis, and sales strategies for assigned territory to ensure your territory meets sales, profit, and unit goals
</li>
</ul>
<h5>The essential requirements of the role include:</h5>
<ul>
<li>Master degree in a Biology / Chemistry / Life Science or similar qualification
</li>
<li>Strong communication and organizational skills, ability to plan and assign resources in a detailed fashion, analytical thinking, able to confidently present ideas
</li>
<li>Valid driver´s license is a must
</li>
<li>Advanced knowledge of both: English and Czech language
</li>
</ul>
<h5>It would be a plus if you also possess previous experience in:</h5>
<ul>
<li>Chromatography (LC, LC-MS, GC, GC-MS, sample prep)
</li>
<li>Sales and local market knowledge
</li>
</ul>
At Phenomenex we believe in designing a better, more sustainable workforce. We recognize the benefits of flexible, remote/hybrid working arrangements for eligible roles and are committed to providing enriching careers, no matter the work arrangement. This position is eligible for a remote/hybrid work arrangement in which you can work remotely from your home or at the Company location . Additional information about this remote/hybrid work arrangement will be provided by your interview team. Explore the flexibility and challenge that working for Phenomenex can provide.
At Danaher we bring together science, technology and operational capabilities to accelerate the real-life impact of tomorrow’s science and technology. We partner with customers across the globe to help them solve their most complex challenges, architecting solutions that bring the power of science to life. Our global teams are pioneering what’s next across Life Sciences, Diagnostics, Biotechnology and beyond. For more information, visit <a href="https://www.danaher.com/">www.danaher.com</a>.
At Danaher, we value diversity and the existence of similarities and differences, both visible and not, found in our workforce, workplace and throughout the markets we serve. Our associates, customers and shareholders contribute unique and different perspectives as a result of these diverse attributes.

Phenomenex: Technical Sales Consultant

Všechny <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/products?category=48&amp;distributorItems=51">HPLC kolony Phenomenex</a> jsou před odesláním testovány v rámci kontroly kvality a uchovány v rozpouštědle, které je obecně stejné jako testovací rozpouštědlo, pokud není uvedeno jiné v CQA dokumentu dodávaném s kolonou.„Kondicionování kolony“ nebo „aktivace“ jsou termíny, které se často používají zaměnitelně. Jednoduše řečeno se tak označují kroky, podniknuté ke změně rozpouštědla ve kterém je kolona uchována, na rozpouštědla specifická pro danou analytickou metodu.<div><div>Při zvažování, jaké kondicionování je nutné, je třeba věnovat pozornost následujícímu:<ul><li>Přepravní rozpouštědlo</li><li>Požadovaná mobilní fáze pro analýzu</li></ul>Je třeba zvážit následující otázky:<ul><li>Jsou tyto dva systémy rozpouštědel mísitelné?</li><li>Obsahuje konečný systém rozpouštědel pufry, které se mohou vysrážet?</li></ul><figure class="image"><img style="aspect-ratio:400/247;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Kinetex_Core_Shell_HPLC_Columns_a720e2efe5.webp" alt="Phenomenex: Kinetex Core-Shell HPLC Columns" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Kinetex_Core_Shell_HPLC_Columns_a720e2efe5.webp 245w," sizes="100vw" width="400" height="247"></figure></div></div><div><div>Při práci s kolonami s reverzní fází, které se obvykle dodávají ve směsi acetonitril:voda v poměru 65:35 a obecně se používají se směsmi buď methanolu nebo acetonitrilu s vodou nebo pufrem, je často možné přejít přímo do plánované mobilní fáze. Pokud jsou koncentrace pufru vyšší než 20 mM, může být nutné nejprve přejít na nový poměr organiky a vody před přídavkem pufru, aby se snížilo jakékoli riziko vysrážení solí.Malý počet stacionárních fází (kyano, amino, diol) může být použit v normální fázi nebo v reverzní fázi. Obvykle se dodávají ve směsích s normální fází, a pokud mají být použity za podmínek reverzní fáze, je vyžadována výměna přes univerzálně mísitelné rozpouštědlo, pro které lze použít následující protokol:<ul><li>Přepravní rozpouštědlo hexan:ACN v poměru 99:1</li><li>Požadovaná mobilní fáze methanol:voda v poměru 50:50</li><li>Propláchněte kolonu THF nebo IPA v množství 30 objemů kolony</li><li>Propláchněte methanolem v množství 10 objemů kolony</li><li>Propláchněte směsí methanol:voda v poměru 50:50, dokud nedosáhnete stabilní základní linie (baseline)</li></ul>V tomto procesu se nejprve použije THF nebo IPA k odstranění hexanu z kolony. To je důležité, protože hexan se nemísí s methanolem ani vodou. Methanol pak nahradí THF nebo IPA v koloně před vlastní mobilní fázi. Při výběru mezi THF a IPA je třeba vzít v úvahu jaký HPLC systém používáte. Pokud jsou hadičky systému nebo armatury vyrobeny z PEEKu, nelze použít THF, a proto je preferována IPA. Pokud je systém z nerezové oceli, lze použít THF nebo IPA. THF má výhodu nižší viskozity.Při kondicionování kolony pro použití v gradientovém systému je dobrou praxí propláchnout kolonu silným rozpouštědlem (obecně rozpouštědlem B) před ekvilibrací kolony v počátečním bodě gradientu. Pomůže to zajistit, aby kolona poskytovala dobrou základní linii při spuštění gradientu. Před nástřikem testovacího standardu je rovněž dobré udělat dva nebo tři slepé gradienty.Často vyvstává otázka: „Jak poznám, že je kolona plně kondicionována?“ Existují dva užitečné způsoby, jak to určit.<ul><li>Při použití UV detektoru by měla být základní linie (baseline) plochá. Obecně při změně složení rozpouštědla se základní linie bude svažovat. Její vyrovnání je dobrá známka toho, že kolona dosáhla rovnováhy s mobilní fází a je připravena k použití.</li><li>Zpětný tlak: Při výměně rozpouštědel, buď během kondicionování nové kolony, nebo na konci gradientu, se zpětný tlak měřený systémem změní. Postupem času se tlak stabilizuje, což ukazuje, že kolona je ekvilibrována. To může být užitečné při práci se systémy MS, kde obecně není sledována základní linie (baseline).</li></ul></div></div>

Kondicionování/aktivace HPLC kolon

1) Polarita – určitou indikaci polarity obvykle poskytne výrobce GC kolony, uvedená hodnota je normálně určena pomocí Kovatsova retenčního času spolu s McReynoldovými čísly. Obecná rada zní, že polarita stacionární fáze by měla přesně odrážet polaritu sledovaných analytů, takže nepolární fáze, jako je ZB-1 (hodnocení 5 na stupnici polarity), by byla dobrou volbou pro analýzu uhlovodíků, zatímco pro alkoholy se často volí <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/products/1582">ZB-Wax</a> (57 na stupnici polarity).2) Selektivita – je řízena různými funkčními skupinami přítomnými v polymerní stacionární fázi, jejímž základem je buď polysiloxan nebo polyethylenglykol. Polysiloxanové fáze budou mít typicky methylové skupiny, fenylové skupiny nebo kyanopropylové skupiny připojené k polysiloxanovým řetězcům, které umožňují vznik celé řady různých interakcí:<ul><li>Metylové skupiny – van der waalsovy or Londonovy síly,</li><li>Fenylové skupiny – pi-pi interakce,</li><li>Kyano skupiny – pi-pi a dipole-dipole interakce.</li></ul>Zvýšení procentuálního zastoupení fenylových nebo kyanopropylových substituentů ve stacionární fázi zvyšuje polaritu. Polyethylenglykolová (PEG) fáze nabízejí místa pro interakce dipól-dipól a vodíkové můstky, PEG fáze jsou typicky jedny z nejpolárnějších dostupných fází.3) Délka – zvětšení délky kolony zvyšuje počet teoretických pater, což napomáhá rozlišení, avšak zvětšující se délka kolony také prodlužuje dobu analýzy. Kolona o délce 30m je obecně dobrým výchozím bodem pro obecný vývoj metod, zatímco 60m kolona se obvykle používá pro analýzu fingerprint složitých směsí. Kolona o délce 15 m se obecně používají, když je požadována rychlá separace méně složitých směsí.4) ID – Volba ID kolony má vliv jak na kapacitu kolony (kolik analytu můžete nastříknout), tak na efektivitu. Čím užší je ID kolony, tím vyšší je účinnost, ale nižší kapacita. Vhodnm výchozím parametrem pro vývoj metody je 0,25 mm ID kolony, který ukazuje dobrý kompromis mezi účinností a kapacitou. Pokud převádíte metodu ze staré plněné GC kolony na kapilární GC kolony, pak se často volí kolony s vnitřním průměrem 0,53 mm kvůli jejich vyšší kapacitě analytu.5) Tloušťka filmu&nbsp; – Tenké filmy poskytují nejvyšší účinnost, ale mají nižší retenci analytu. Silnější film mají vyšší kapacitu, ale při vysokých teplotách vedou k většímu propouštění. Pokud se rozhodnete použít tenký film (0,1 - 0,25 µm) s aktivními analyty, je výhodné vybrat kolonu, která je vysoce deaktivovaná, aby se zabránilo chvostování píku. Takové kolony obecně poskytují nižší propouštění.

Jaké parametry vzít v úvahu při výběru GC kolony pro mou aplikaci?

Jednou z nejčastějších příčin krátké životnosti kolony je kontaminace kolony, která často vede k vysokému zpětnému tlaku a takzvané „ucpané“ vstupní fritě.Tento technický tip si klade za cíl vysvětlit, co se děje, a také jak se lze vyhnout kontaminaci kolony.Při výrobě kolon pro HPLC a UHPLC na bázi částic se frity používají k zabránění vstupu cizího materiálu do kolony a k zabránění tomu, aby náplň z HPLC kolon neunikala. Tyto frity jsou kotouče z porézního kovu, obecně o porozitě 0,5, 1,0 nebo 2,0 µm. Pokud vzorky obsahují nerozpuštěný materiál, bude odfiltrován z proudu rozpouštědla mobilní fáze, který se nachází na vnější straně vstupní frity. Jak tento proces pokračuje, dostupný povrch frity pro průchod mobilní fáze se zmenšuje, což omezuje tok mobilní faze a zvyšuje protitlak. Nakonec je téměř nemožné protlačit rozpouštědlo přes fritu a čerpadlo HPLC se vypne.Tomuto procesu lze zabránit filtrací vzorků před nástřikem do HPLC systému. Obecně se doporučuje používat 0,45 µm porézní <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://www.phenomenex.com/products/phenex-syringe-filters?_gl=1*befa9s*_ga*MTM5ODI2NzM3NS4xNzQyMjc3MDM0*_ga_790WGKEF4G*MTc0MjI4MDQ5NC4yLjAuMTc0MjI4MDQ5NC4wLjAuMA..">stříkačkové filtry </a>pro vzorky, které budou měřeny na 5 µm kolonách, 0,2 µm filtry pro 3 µm kolony a menší. Je třeba dbát na to, aby v ideálním případě rozpouštědlo přidávané ke vzorku odpovídalo mobilní fázi. Pokud tomu tak není, můžete se stát, že některé složky vzorku jsou rozpustné v rozpouštědle přidávaného ke vzorku, což jim umožňuje projít filtrem injekční stříkačky.Když jsou vstřikovány do mobilní fáze, mohou se vysrážet a způsobit ucpání frity. Tomu lze předejít buď rozpuštěním vzorku v mobilní fázi, nebo alternativně instalací vstupní frity nebo<a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://www.phenomenex.com/products/securityguard-lc-guard-cartridge-system?_gl=1*1bfvfj1*_ga*MTM5ODI2NzM3NS4xNzQyMjc3MDM0*_ga_790WGKEF4G*MTc0MjI4MDQ5NC4yLjAuMTc0MjI4MDQ5NC4wLjAuMA.."> guard cartridge</a> jako spotřebního vyvení, aby se zabránilo znečištění vstupu kolony. &nbsp;<blockquote>Případně máme tento <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://app.explore.phenomenex.com/e/er?s=822460770&amp;lid=8337&amp;elqTrackId=7D1B2E6743B19B5717AFAEFF00F8A51C&amp;elq=00000000000000000000000000000000&amp;elqaid=4836&amp;elqat=2&amp;elqak=8AF5E09C05D0B7BFE5B44C560E3733C27992CF7C906A90E1BF5C55FDC1EA7D8B80B0&amp;_gl=1*1uyr77*_ga*MTM5ODI2NzM3NS4xNzQyMjc3MDM0*_ga_790WGKEF4G*MTc0MjI4MDQ5NC4yLjAuMTc0MjI4MDQ5NC4wLjAuMA..">webový nástroj</a>, který vás provede výběrem ochranné kazety.</blockquote>

Kontaminace kolon – jak k ní dochází a jak se jí lze vyhnout

<h4>HPLC metoda - Proč je to důležité</h4>Následující technika související s metodou navrhuje vylepšení zvyšující výkon při všech separacích. Při použití kolon s core-shell částicemi mohou tyto techniky výrazně zlepšit výkon vaší metody.Metody HPLC by se měly nejprve zaměřit na zaostření vzorku na vstupu kolony a poté minimalizovat disperzi vzorku kolonou. Když minimalizujete rozšíření pásma snížením rozptylu vzorku, zlepšíte citlivost a rozlišení svého píku.&nbsp;Začlenění jednoduchého programování injektoru do metody může minimalizovat extra-column volume, aby se zlepšil tvar píku a účinnost, zejména pro rychlé LC separace.<h4>Problém: Všechny píky jsou široké</h4>1. Zkontrolujte objem nástřiku: Chyby v nasávání vzorků mohou negovat zvýšení výkonu, kterého můžete dosáhnout použitím core-shell částic. Pokud nastřikujete vzorek ve stejném organickém složení jako mobilní fáze za izokratických podmínek, bude počáteční šířka pásma na koloně přímo úměrná objemu nástřiku. Jako takový je do kolony vstřikován velkoobjemový vzorek jako široký pás a poskytuje nízkou účinnost.Řešení: Aby se snížila ztráta účinnosti u velkoobjemových nástřiků, je možné předem koncentrovat vzorek na začátku kolony pomocí slabšího ředícího roztoku než mobilní fáze. Můžete také snížit objem nástřiku. Pokud se používají kolony s vysokou účinností, je pro získání dobré odezvy signálu často zapotřebí menší množství vzorku.&nbsp;2. Zkontrolujte roztok k ředění vzorku: Pokud je organická síla roztoku větší než síla HPLC mobilní fáze, pak se vzorek nanese jako difúzní pás v čele HPLC kolony. K tomu může dojít v izokratických nebo gradientových metodách a může to negovat většinu výkonnostních výhod, které tyto kolony přináší.<ul><li>Gradientní metody, při kterých je vzorek vstřikován v silnějším rozpouštědle než mobilní fáze, vykazuje sloučenina tzv. surfovací účinky, což způsobí, že se píky rozšíří a rozdělí.</li><li>Izokratické metody, kde je rozpouštědlo silnější než mobilní fáze, povedou k nadměrné disperzi vzorku.</li></ul>Řešení: Nastříkněte slabé rozpouštědlo. Nejlepší je použít ředící roztok, který je slabší nebo roven organické síle mobilní fáze, aby se vzorek soustředil na začátku kolony, což by mělo za následek ostřejší píky (tj. vyšší účinnost).<h4>Cíl: Zkrátit čas metody (runtime) a kapacitu píků v gradientových metodách</h4>Zkontrolujte vstřikovací program: Extra-column volume předtím než způsobí disperzi vzorku na cestě do kolony; nástřiková smyčka je hlavním zdrojem extra-column volume.<figure class="image"><img style="aspect-ratio:464/251;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Optimalizace_LC_systemu_na_UHPLC_vykon_na_jakemkoliv_HPLC_2_71c1c46674.jpg" alt="Phenomenex: Obrázek 1" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Optimalizace_LC_systemu_na_UHPLC_vykon_na_jakemkoliv_HPLC_2_71c1c46674.jpg 245w," sizes="100vw" width="464" height="251"></figure>Řešení: Během analytické metody (poté, co vzorek opustil injektorovou smyčku) je možné smyčku obejít injektorovým programem. Tabulka 1 a obrázek 1 ukazují příklad, kdy je vstřikovací smyčka po injekci obcházena, aby se snížil objem prodlevy systému.<figure class="image"><img style="aspect-ratio:915/458;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Optimalizace_LC_systemu_na_UHPLC_vykon_na_jakemkoliv_HPLC_b5445a0d4c.jpg" alt="Phenomenex: Tabulka 1" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Optimalizace_LC_systemu_na_UHPLC_vykon_na_jakemkoliv_HPLC_b5445a0d4c.jpg 245w," sizes="100vw" width="915" height="458"></figure>

Optimalizace LC systému na UHPLC výkon na jakémkoliv HPLC

<h4>Kontrolní seznam před instalací</h4><ul><li>Podle potřeby vyměňte trapy kyslíku, vlhkosti a uhlovodíků.</li><li>Zkontrolujte tlaky v plynových lahvích, abyste se ujistili, že jsou k dispozici dostatečné zásoby nosných, doplňovacích a palivových plynů. Nosné plyny by měly mít nejvyšší čistotu.</li><li>Zajistěte, aby byl injekční port čistý a bez zbytků vzorku, septa nebo kapilárních nečistot.</li><li>Zkontrolujte a podle potřeby vyměňte kritické součásti vstřikovače, jako jsou těsnění, vložky a septa.</li><li>Zkontrolujte a podle potřeby vyměňte těsnění detektoru.</li><li>Pečlivě zkontrolujte vaši kolonu, zda není poškozená nebo zlomená.</li></ul>Poznámka: Je důležité, aby byl kyslík a voda odstraněny z nosného plynu vhodným použitím filtrů a adsorbentů<h4>Instalace injektoru</h4>Poznámka: GC kolony nemají při dodání od výrobce specifický směrový tok. Při prvním použití vaší nové GC kolony se doporučuje vyhradit jeden konkrétní konec kolony pouze pro instalaci injektoru. To je zvláště důležité při práci s aktivními/žíravými nebo kontaminujícími sloučeninami. Pokud jsou tyto sloučeniny běžně vstřikovány do kolony, dojde k degradaci fáze, což povede k vyšší míře bleedingu. Typickým prvním krokem k nápravě (odstranění) bleedingu by bylo seříznout 10 cm od předního (injektorového) konce kolony a podle potřeby nadále ořezávat tento vstupní konec kolony. Pokus o nápravu problémů s bleedingem oříznutím kolony nemusí fungovat, pokud byly oba konce střídavě instalovány na vstupu.<ol><li>Umístěte kapilární matici a objímku na konec injektoru GC kolony tak, aby část kolony vyčnívala. Odřízněte jeden až dva centimetry od vyčnívajícího konce, abyste odstranili kontaminaci objímky, která se mohla dostat do kolony. Zkontrolujte řez pomocí lupy, abyste se ujistili, že byla vytvořena hladká, čistá hrana se čtvercovým řezem - v případě potřeby znovu seřízněte.</li><li>Opatrně zavěste kolonu do GC pece, dávejte pozor, abyste nepoškrábali nebo nepoškodili polyimidový povlak na kapilární trubici. Otáčejte kolonou, abyste se vyhnuli ostrým ohybům kapilární kolony a jakémukoli kontaktu kolony s povrchy pece.</li><li>Vložte kolonu do injektoru přesně ve správné vzdálenosti uvedené v návodu k přístroji. Utáhněte matici objímky prstem a poté o 1/2 otáčky klíčem. Pokud lze sloupek stále posunout, utáhněte ještě o 1/4 otáčky, dokud nebude sloupek zajištěn.</li><li>Upravte nosný plyn tak, abyste dosáhli průtoku uvedeného na zkušebním chromatogramu.</li></ol>

Instalace kolony pro plynovou chromatografii (GC) - Injektor

Pufr je VODNÝ roztok obsahující slabou kyselinu a její konjugovanou bázi (nebo slabou bázi a její konjugovanou kyselinu). Po přidání malého množství silné kyseliny nebo zásady se pH pufrovacího roztoku mění velmi málo a může tak pomoci zamezit změnám podmínek v analytické metodě při malých odchylkách faktorů prostředí. Pufrovací roztoky se používají k udržení pH na téměř konstantní hodnotě. Jsou odolné vůči změně pH v důsledku přítomnosti rovnováhy mezi touto slabou kyselinou (HA) a její konjugovanou bází (B).<figure class="image"><img style="aspect-ratio:468/71;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_4_b14eb6f285.jpg" alt="Phenomenex: Význam správně připravené mobilní fáze." srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_4_b14eb6f285.jpg 245w," sizes="100vw" width="468" height="71"></figure><h4>Jak fungují pufry</h4>Když se do rovnovážné směsi slabé kyseliny a její konjugované báze přidá nějaká silná kyselina (více H+), rovnováha se posune doleva v souladu s Le Chatelierovým principem. Podobně, pokud je do směsi přidána silná báze, koncentrace vodíkových iontů klesá o méně než množství očekávané pro množství přidané báze.Při přípravě pufrů existuje několik obecných pokynů, které byste měli dodržovat:<ul><li>Kalibrujte pH metr; ideálně při hodnotách pH nad a pod cílovou hodnotou pro přípravu pufru.</li><li>K tomuto účelu se prodávají kalibrační pufrovací roztoky.</li><li>Odvažte sůl pufru, abyste dosáhli požadované koncentrace pufru.</li><li>Přidejte ji do odměrné baňky obsahující vodu v čistotě pro HPLC a důkladně promíchejte, aby se rozpustila.</li><li>Pomocí pH sondy a pH metru změřte pH roztoku.</li><li>Upravte pH na požadovanou hodnotu přidáním malého objemu silné kyseliny a/nebo silné báze.</li><li>Jakmile je pH správné, zřeďte roztok na konečný požadovaný objem a dobře promíchejte.</li></ul>V HPLC se pufry obvykle používají k ovlivnění sekundárních interakcí, které jsou v chromatografii obecně považovány za „nežádoucí“. Používají se také k řízení ionizačního stavu analytu, aby se zajistilo, že není přítomen ve více než jednom ionizovaném stavu. pKa sloučeniny představuje pH, při kterém je z 50% ionizovaná a z 50% neutrální. Pokud pracujete při tomto pH, uvidíte rozdělené píky (split peaks) a proměntlivé retenční časy. Všechny metody by měly být alespoň dvě jednotky pH od pKa cílového analytu.<figure class="image"><img style="aspect-ratio:960/521;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_822a0786d0.jpg" alt="Phenomenex: Význam správně připravené mobilní fáze." srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_822a0786d0.jpg 245w," sizes="100vw" width="960" height="521"></figure><figure class="image"><img style="aspect-ratio:960/320;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_2_e5b5a8b4c3.jpg" alt="Phenomenex: Význam správně připravené mobilní fáze." srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_2_e5b5a8b4c3.jpg 245w," sizes="100vw" width="960" height="320"></figure>Při přípravě izokratických mobilních fází je několik dalších hledisek k zajištění dostatečné robustnosti metody.<ul><li>Pokud je to možné, předem promíchejte svou mobilní fázi, čímž se eliminuje chyba pumpy.</li><li>Pro přípravu používejte vždy stejnou metodu; například pokud nejprve přidáte vodu, měli byste ji vždy přidat jako první. Pokud jednotlivé komponenty změříte a poté promícháte, měli byste to dělat vždy tímto způsobem. Tento proces neměňte, protože výsledky se mohou významně lišit, pokud jde o retenční čas analytu.</li></ul>Níže je experiment, který ukazuje tuto variabilitu, když byly mobilní fáze smíchány následujícími způsoby.<ul><li>Nejprve voda: 400 ml vody v odměrném válci, přidejte do 1 litrové odměrné baňky, zřeďte po značku MeOH</li><li>Nejprve MeOH: 600 ml MeOH v odměrném válci, přidejte do odměrné baňky o objemu 1 litr, zřeďte po značku vodou</li><li>MeOH a voda měřeny jednotlivě: 600 ml MeOH v odměrném válci, přenos do zásobníku mobilní fáze; 400 ml vody ve stejném odměrném válci a převedeno do zásobníku mobilní fáze</li><li>Nechte čerpadlo smíchat A = vodu s B = MeOH</li></ul><figure class="image"><img style="aspect-ratio:960/703;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_3_51ea3293e9.jpg" alt="Phenomenex: Význam správně připravené mobilní fáze." srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Vyznam_spravne_pripravene_mobilni_faze_3_51ea3293e9.jpg 213w," sizes="100vw" width="960" height="703"></figure>Koncentrace pufru jsou také důležité, obecně se má za to, že koncentrace pod 10 mM nenabízejí pufrovací kapacitu potřebnou k ovlivnění aktivity silanolu, nebo ionizačního stavu sloučeniny. Koncentrace 10 mM je považována za minimální efektivní koncentraci pro reverzní fázi a HILIC. U jiných technik, jako je size exlucion, jsou vyžadovány výrazně vyšší koncentrace a u těchto metod nejsou neobvyklé koncentrace vyšší než 100 mM. Koncentrace pufru je něco, co musí být pečlivě vyváženo, aby byla zajištěna rozpustnost za všech podmínek. Pokud pracujete s reverzní fází, možná budete muset omezit koncentraci pufru, se kterým pracujete, pokud metoda obsahuje vysoké hladiny organických látek (například přes gradient), aby se předešlo vysrážení pufru.Mobilní fáze přispívá k selektivitě stejně jako Vaše stacionární fáze. Její správný výběr a příprava je stejně důležitá jako testování šarží stacionárních fází při vývoji robustních HPLC metod.

Význam správně připravené mobilní fáze

Každý SPE mechanismus/fáze má obecný soubor doporučených rozpouštědel, se kterými lze extrakci provést. Použijte rozpouštědla/podmínky pH uvedené níže, objemy stanovené v sekci <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://discover.phenomenex.com/spe-technical-tip-part2-cz?elqTrackId=29226FEFC5A60FEE662A3AFFB8145DA7&amp;elq=00000000000000000000000000000000&amp;elqaid=4392&amp;elqat=2&amp;elqCampaignId=&amp;elqak=8AF5CFFF4EA7A7AB7A790F6665CFD43E0ECFCF7C906A90E1BF5C55FDC1EA7D8B80B0">Metod a Výběr objemu sorbentu.</a><h4>SPE metoda pro reverzní fázi</h4><h5>Sorbent - SDB-L, C18, C8, PH, CN, X, XL</h5><ul><li>Vlastnosti analytu: Nízká až střední polarita (nebo nepolární) Hydrofóbní neutralizovaný/nenabitý - Léčiva, pesticidy, herbicidy</li><li>Vzorek/Matrix: Vodné, ředěné pufrem - Biologicé roztoky, voda</li><li>Přípravný krok<ul><li>Solvace – polární organická rozpouštědla - Metanol</li><li>Ekvilibrace – vodné, pufry - Voda nebo pufr</li></ul></li><li>Promývací krok: Vodné pufry s 5 až 50 % polární organickou příměsí - Metanol:Voda (5:95)</li><li>Eluční krok: Polární nebo nepolární organická rozpouštědla s nebo bez vody, pufru a/nebo silné kyseliny či zásady - Metanol:Acetontril (50:50)</li></ul><h4>SPE metoda pro normální fázi</h4><h5>Sorbent - Silica, Florisil®, NH2, CN</h5><ul><li>Vlastnosti analytu: Sloučeniny střední až vysoké polarity (neutralizované/nenabité) – Pesticidy</li><li>Vzorek/Matrix: Nepolární organická rozpouštědla nebo středně polární organická rozpouštědla – Hexan, chloroform, petrolether, toluen nebo methylenchlorid</li><li>Přípravný krok<ul><li>Solvatace – polární organická rozpouštědla (volitelné) – Metanol (volitelné)</li><li>Ekvilibrace – rozpouštědlo vzorku/matrice – Hexan nebo chloroform</li></ul></li><li>Promývací krok: Nepolární organická rozpouštědla s nízkou koncentrací (1 až 5 %) organického rozpouštědla střední až nízké polarity – Hexan s 1 % THF, ethylacetát, aceton, acetonitril nebo IPA</li><li>Eluční krok: Nepolární organická rozpouštědla obsahující vyšší koncentraci (5 až 50 %) středně až vysoce polárních organických rozpouštědel – Hexan s 10 % THF, ethylacetát, aceton, acetonitril nebo IPA</li></ul><h4>SPE metoda pro silný iontoměnič</h4><h5>Sorbet:&nbsp;Aniontová výměna: Screen-A, SAX, X-A, X-AW, XL-A, XL-AW Kationtová výměna: Screen-C, SCX, X-C, X-CW, XL-C, XL-CW</h5><ul><li>Vlastnosti analytu: Ionizované/nabité látky – Aniontová výměna: Kyselý analyt</li><li>Kationtová výměna: Bazický analyt</li><li>Vzorek/Matrix: Vodný; Pufry s nízkou iontovou silou (&gt; 30 mM), pH upraveno – Biologické tekutiny s pufrem</li><li>Přípravný krok&nbsp;<ul><li>Kondicionace – polární organická rozpouštědla – Metanol</li><li>Ekvilibrace – pufry s nízkou iontovou silou, pH upraveno – 25 mM Tris-OAc, pH 7</li></ul></li><li>Promývací krok: Vodné pufry s nízkou koncentrací solí s nebo bez organického rozpouštědla&nbsp;<ul><li>Aniontová výměna&nbsp;<ul><li>Pufr pH 7: Metanol (50:50)</li></ul></li><li>Kationtová výměna<ul><li>Pufr pH 6</li><li>1M kyselina octová</li><li>Metanol</li></ul></li></ul></li><li>Eluční krok<ul><li>Neutralizujte náboj na slabém aniontu nebo kationtu</li><li>Zvyšte iontovou sílu a koncentraci protiiontů</li><li>Přidejte silný vytěsňovač protiiontů&nbsp;<ul><li>Aniontová výměna – Hexan:ethylacetát (75:25) + 1 % ledová kyselina octová</li><li>Kationtová výměna – Methanol + 5 % NH3</li></ul></li></ul></li></ul><blockquote>POZNÁMKA: Toto jsou obecné výchozí podmínky. Pro další pomoc <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://discover.phenomenex.com/customersupportEU?elqTrackId=E77367916EB097F21410859976B9364C&amp;elq=00000000000000000000000000000000&amp;elqaid=4392&amp;elqat=2&amp;elqCampaignId=&amp;elqak=8AF505951C4408055571313E3C6D3EBAD7D4CF7C906A90E1BF5C55FDC1EA7D8B80B0">se prosím obraťte</a> na svého technického poradce Phenomenex.</blockquote>

Obecná SPE metoda dle retenčního mechanismu

Extrakce na pevné fázi se rutinně volí jako technika přípravy vzorku před analýzou HPLC a GC. Poskytuje:<ul><li>Přečistění</li><li>Pre-koncentraci analytů</li><li>Výměnu rozpouštědla</li></ul>To funguje dobře pro jakékoli homogenní kapalné vzorky, ale nerozpustný vzorek jednoznačně nelze aplikovat přímo na zařízení SPE. Zde zvážujeme, jak nejlépe přistupovat k manipulaci s nerozpustnými vzorky před SPE.První stupeň předúpravy vzorku zahrnuje homogenizaci nerozpustného vzorku s vhodným rozpouštědlem. Rozpouštědlo vybrané pro tento účelby mělo:<ul><li>Být efektivní při rozpouštění analytu</li><li>Být efektivní při rozpouštění matrice vzorku, i když to není nutné, pokud je vzorek dobře smíchán s rozpouštědlem</li><li>V ideálním případě být slabé rozpouštědlo, pokud jde o fázi SPE. To nemusí být vždy možné a proto někdy musí být vzorek před nanesením do SPE zkumavky vzorek odpařen a rekonstituován</li></ul>Po vytvoření suspenze vzorku ve vhodném rozpouštědle by měl být vzorek promíchán na vortexu, aby se podpořilo důkladné promíchání, a poté odstředěn, aby nerozpustné složky matrice sedimentovaly. Rozpouštědlo by pak mělo být odebráno pro další zpracování.V tomto okamžiku je třeba zvolit mechanismus SPE:<h4>SPE metoda na reverzních fázích</h4><h5>Mechanismus &nbsp;/&nbsp;&nbsp;Slabé rozpouštědlo &nbsp;/&nbsp;&nbsp;Silné rozpouštědlo</h5><ul><li>Reverzní fáze - Voda/pufr - Acetonitril/Metanol (hexan jako nejsilnější)</li><li>Normální fáze - Hexane/Heptan - Středně polární organická rozpouštědla jako DCM, MTBE, IPA (voda jako nejsilnější)</li><li>Iontová výměna - Vodný pufr o pH, které podporuje iontově výměnné interakce mezi analytem a SPE sorbentem - Organické rozpouštědlo, typicky methanol s úpravou pH k narušení iontoměničových interakcí</li></ul>V tomto bodě je třeba vzít v úvahu vlastnosti analytu i ředidlo vzorku. Extrakce na reverzních fázích jsou účinné pro středně polární až středně hydrofobní analyty, ale pouze pokud jsou rozpuštěny ve slabém rozpouštědle, jako je voda. Pokud je vzorek rozpuštěn ve středopolárním rozpouštědle, bude nutné vzorek buď naředit, nebo alternativně odpařit a rekonstituovat. Totéž platí pro normální fázi, kde je třeba vzorky rozpustit v hexanu/heptanu, aby se analyty úspěšně zachytily během nanášení vzorku do SPE zkumavky.<h5>Tyto příklady snad tento koncept ilustrují.</h5>1) Extrakce PCBs z půdyPCBs jsou hydrofobní a snadno se rozpouštějí v nepolárním rozpouštědle. Půdu lze vysušit, zvážit a poté extrahovat pomocí hexanu (nebo heptanu). Po důkladném promíchání a odstředění může být výsledný roztok aplikován přímo do kondicionované silikátové SPE zkumavky umožňující provedení extrakce na normální fázi.2) &nbsp;Tylosin z masaTylosin je antibiotikum s log P 1,0. Extrakce z masa směsí acetonitrilu a vody (80:20) naruší jakékoli hydrofobní interakce uvolňují tylosin. Po odstředění bude výsledný kapalný vzorek vyžadovat další ředění vodou, aby se snížila síla nanášeného rozpouštědla před extrakcí s reverzní fází.3) Enilkonazol z pomerančůEnilconazol je fungicid široce používaný v zemědělství a často se používá s citrusovými plody. Lze jej snadno extrahovat z pomerančů pomocí acetonitrilu. Protože enilkonazol je zásaditý, přidání HCl do acetonitrilového extraktu podpoří protonaci analytu, což umožní jeho přímé zadržování na silném kationtoměničovém materiálu SPE. To značně zjednodušuje proces extrakce, protože není vyžadováno žádné ředění vzorku (na rozdíl od reverzní fáze nebo extrakce na normální fázi, kde by 100% acetonitril způsobil, že by analyt během nanášení nebyl zadržen).<blockquote>Pro další rady nebo návrhy týkající se přípravy vzorků navštivte: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="http://www.phenomenex.com/techniques/solid-phase-extraction">www.phenomenex.com/techniques/solid-phase-extraction</a></blockquote>

Možnosti ke zvážení v případě práce s nerozpustnými vzorky a SPE

<h4>Shrnutí</h4>Současná nová léčiva se z pohledu chromatografie vyznačují řadou výzev, ať už je to detekce nebo rozlišení od koelujících nečistot, nicméně největší překážkou bývá retence a rozlišení polárních sloučenin, které nejsou vhodné pro typické podmínky reverzní fáze C18.Mnoho tradičních stacionárních fází HPLC s reverzní fází neposkytuje dostatečnou retenci pro mnohé ze stále se zvyšujícího počtu polárních sloučenin analyzovaných pomocí HPLC. Tyto sloučeniny jsou často buď nezachyceny nebo je jejich retence nedostačující a tudíž je narušen tvar píku či koelují s jinými analyty se slabou retencí. Slabě zadržované analyty eluují v oblasti iontové suprese, což způsobuje problémy v rámci LC-MS analýzy.Tento technický tip představuje <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/products?category=347&amp;manufacturerItems=50">HILIC HPLC kolony</a> jako alternativní možnost, která je účinná zejména pro LC-MS. HILIC používá k eluci polárních sloučenin vysoké hladiny organického rozpouštědla, což pomáhá zlepšit jejich ionizační účinnost během LC-MS.<h5>Tip:&nbsp;</h5>HILIC funguje tak, že zadržuje polární sloučeniny ve vodní vrstvě, která se tvoří na povrchu silika částic (obr.1).<figure class="image"><img style="aspect-ratio:800/425;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Uspesne_technicke_reseni_analytickych_metod_pomoci_HILIC_jako_alternativniho_retencniho_mechanismu_bb362df4ea.jpg" alt="Phenomenex: Úspěšné technické řešení analytických metod pomocí HILIC jako alternativního retenčního mechanismu: Obr. 1" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Uspesne_technicke_reseni_analytickych_metod_pomoci_HILIC_jako_alternativniho_retencniho_mechanismu_bb362df4ea.jpg 245w," sizes="100vw" width="800" height="425"></figure><div>Acetonitril (MeCN) je slabé rozpouštědlo používané v HILIC a amonný pufr je rozpouštědlo silné. Amonné soli jsou zásadní jako protiionty usnadňující tvorbu dvojvrstvy důležitou pro separaci, která je znázorněna na obr. 1.</div>Polární stacionární fáze přitahuje vodní vrstvu čímž podporuje retenci polárních sloučenin. Polární sloučeniny se eluují se zvyšujícím se množstvím vody, což narušuje retenci polárních analytů k polární stacionární fázi, nezbytné k vyvolání eluce.Je důležité před použitím HILIC kolonu prvně ekvilibrovat, abychom zajistili dostačný čas k vytovření vodní vrstvy. Pokud nedojde k její tvorbě, tak retence bude nekonzistentí a metoda nebude dostatečně robustní.Zmínili jsme použití amonných pufrů, ale v rámci metody HILIC však existuje několik dalších faktorů, které jsou stejně zásadní pro její úspěch.První je selektivita, pro kterou je klíčová spravná volba kolony. Stejně jako u kolon s reverzní fází existuje pro HILIC mnoho různých stacionárních fází a každá z nich se vyznačuje různou selektivitou a dalšími benefity. Doporučujeme Vám vždy prověřit 3 různé fáze, abyste se ujistili, která nabízí nejlepší selektivitu pro Vaši aplikaci.<h5>Mezi HILIC stacionární fáze, které byste mohli zvážit, patří:</h5><ul><li>nemodifikovaná silika jako <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/products?category=347&amp;manufacturerItems=50&amp;search=Kinetex">Kinetex HILIC</a></li><li>diolové fáze jako <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/products?category=347&amp;manufacturerItems=50&amp;search=Luna">Luna HILIC</a></li><li>NH2 fáze</li><li>iontové / zwitteriontové</li></ul>Pokud jde o mobilní fázi, je důležité použít MeCN jako organickou složku - protická rozpouštědla, jako je methanol, mohou narušit dvouvrstvou formaci, o které jsme mluvili. Důležité je také množství organické složky, jejiž příliš vysoké procento v počátečním gradientovém bodě zkomplikuje a prodlouží ekvilibraci dvouvrstvy; 90% organické složky je pro začátek ideální.Pokud je to možné, tak gradientový profil by měl být 90% MeCN - 50%. Tímto způsobem lze zajistit plnou ekvilibraci na začátku gradientu. Pokud jsou k eluci sloučeniny vyžadovány podmínky větší než 50% pufru, bude lepší volbou polární typ C18 stacionární fáze, nikoliv HILIC. Po každém gradientu je nutná ekvilibrace dvouvrstvy. Čím vyšší je procento pufru na konci gradientu, tím delší bude proces ekvilibrace. Nedostatečná ekvilibrace bude mít za následek zhoršenou reprodukovatelnost a metoda nebude dostatečně robustní.Posledním parametrem, který je potřeba vzít v úvahu, je pH. Měly by být testovány nejméně 2 různé hodnoty pH. Obvykle se doporučuje pH 3.2 s použitím mravenčanu amonného a 5.8 s použitím acetátu amonného. Různé hodnoty pH mohou vést k výrazně odlišným selektivitám (obr. 2).<div><figure class="image"><img style="aspect-ratio:940/317;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Phenomenex_Uspesne_technicke_reseni_analytickych_metod_pomoci_HILIC_jako_alternativniho_retencniho_mechanismu_2_cfa1c4dd2b.jpg" alt="Phenomenex: Úspěšné technické řešení analytických metod pomocí HILIC jako alternativního retenčního mechanismu: Obr. 2 Zásadní rozdíly v eluci v závislosti na typu mobilní a stacionární fázi." srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Phenomenex_Uspesne_technicke_reseni_analytickych_metod_pomoci_HILIC_jako_alternativniho_retencniho_mechanismu_2_cfa1c4dd2b.jpg 245w," sizes="100vw" width="940" height="317"></figure>HILIC je mimořádně užitečný nástroj pro zlepšení retence polárních sloučenin. Tato technika patří k náročnějším pokud jde o robustnost metody, nicméně pečlivá volba mobilní fáze a parametrů metody může vést k úspěšným separacím i náročnějších sloučenin.</div>

Úspěšné technické řešení analytických metod pomocí HILIC jako alternativního retenčního mechanismu

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

PFAS

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Společnost Phenomenex je celosvětovým technologickým lídrem, který se zabývá vývojem nových řešení v oblasti analytické chemie, jež řeší požadavky analytiků na separace a purifikace v průmyslových, vládních a akademických laboratořích.

Úspěšné technické řešení analytických metod pomocí HILIC jako alternativního retenčního mechanismu

Možnosti ke zvážení v případě práce s nerozpustnými vzorky a SPE

Optimalizace LC systému na UHPLC výkon na jakémkoliv HPLC

Obecná SPE metoda dle retenčního mechanismu

Kontaminace kolon – jak k ní dochází a jak se jí lze vyhnout

Instalace kolony pro plynovou chromatografii (GC) - Injektor

Význam správně připravené mobilní fáze

Jaké parametry vzít v úvahu při výběru GC kolony pro mou aplikaci?

Kondicionování/aktivace HPLC kolon

Phenomenex: Technical Sales Consultant

Nejbližší akce

27. Škola hmotnostní spektrometrie 2026

Validace analytické metody a použití programu Excel - 2026

Altium Podzimní semináře na Moravě 2026

Webináře

How to Perform Routine Quantification by FTIR: Tips & Tricks Workshop

Learn How FTIR Can Help You with Contamination and Poor Product Quality

Expanding the Evidence: New Data for More Reliable PFAS Analysis