Úloha end-cappingu v reverzní fázi (RP)

Silikagel používaný k plnění HPLC kolon je polymerem křemíku a kyslíku s povrchovými skupinami Si–OH (silanoly). Na tyto silanolové skupiny se navazují funkční skupiny pomocí silanizačního činidla za účelem funkcionalizace základního nosiče.

Při funkcionalizaci HPLC kolon není možné dosáhnout 100% pokrytí fáze ani navázat všechny dostupné silanolové skupiny (volné hydroxylové skupiny na povrchu silikagelu) na stacionární fázi. Vlivem sterických překážek se s postupujícím navazováním fáze zvyšuje prostorové omezení, takže další reakce jsou obtížnější než ty předchozí.

Bez end-cappingu by na koloně zůstalo značné množství přístupných, vysoce reaktivních zbytkových silanolových skupin, které mohou ovlivnit selektivitu stacionární fáze. Tyto zbytkové skupiny mohou vytvářet silné iontové a polární interakce (často označované jako „sekundární interakce“) s polárními a bazickými skupinami v analyzovaných sloučeninách. Proto je snížení počtu volných silanolů po navázání stacionární fáze pomocí end-cappingu nezbytné.

Historicky se k end-cappingu používaly malé hydrofobní skupiny, povahou podobné trimethylsilanu. V posledních letech někteří výrobci zavedli další typy skupin, které dodávají koloně nový selektivní prvek.

Phenomenex: Úloha end-cappingu v reverzní fázi (RP).

Pokud end-cappingové činidlo obsahuje nabité funkční skupiny, propůjčuje povrchu iontoměničovou funkci a dává koloně iontoměničové vlastnosti spolu s reverzně-fázovými interakcemi vycházejícími z C18 ligandů. Podobně polární skupiny dodávají povrchu polární charakter.

Phenomenex: Úloha end-cappingu v reverzní fázi (RP).

Nyní, když jsme si vysvětlili roli end-cappingu, shrňme si hlavní přínosy funkcionalizace silikagelu v závislosti na použitých chemických skupinách.

Phenomenex: Úloha end-cappingu v reverzní fázi (RP).

Stručně řečeno, nové technologie end-cappingu mohou významně zlepšit analýzu sloučenin, které dříve představovaly chromatografickou výzvu. Například dnes lze dosáhnout vynikajícího tvaru píků a kratších retenčních časů při analýze bazických léčiv pomocí kolon PS-C18. Fáze Polar C18 se osvědčila pro retenci metabolitů a fáze XB-C18 poskytuje výbornou chromatografii peptidů, s výrazně vyšší retencí malých polárních peptidů.