ProtiFi S-Trap™ 96-well Micro Plate je 96jamková destička pro paralelní přípravu až 96 proteinových vzorků před LC-MS/MS proteomickou analýzou. Varianta Micro je určena pro vzorky obsahující 1–100 µg celkového proteinu na jamku a využívá technologii S-Trap™ pro solubilizaci proteinů pomocí SDS, jejich zachycení, odstranění kontaminujících látek a enzymatickou digesci přímo v destičce.
96jamkový formát je vhodný pro vysokokapacitní a automatizované workflow. Destičky lze zpracovávat centrifugací, vakuem nebo pozitivním tlakem a jsou kompatibilní s automatizačními platformami, včetně Tecan A200 Positive Pressure Workstation a Agilent Bravo.
Princip technologie S-Trap™
S-Trap™ workflow umožňuje používat SDS pro účinnou lýzu a solubilizaci biologických vzorků. Proteiny jsou následně acidifikovány na pH <1 a vystaveny vysoké koncentraci methanolu. Tato kombinace vede k úplné denaturaci proteinů a potlačení nežádoucí enzymatické aktivity, například proteáz a fosfatáz.
Denaturované, nenaštěpené proteiny jsou následně zachyceny prostřednictvím více slabých interakcí v pórech derivatizované S-Trap™ matrice. Během promývání lze odstranit například:
- SDS a další detergenty
- soli
- pufry
- PEG
- glycerol
- složky Laemmliho pufru
- stabilizátory a další látky nevhodné pro MS
Po přidání proteázy probíhá digesce přímo v submikronových pórech matrice. S-Trap™ nemá afinitu k vzniklým peptidům, které lze po digesci eluovat pro následnou LC-MS/MS analýzu.
Standardní workflow
- Solubilizace a denaturace proteinů v SDS
- Redukce
- Alkylace
- Okyselení na pH ≤1
- Přidání methanolového vazebného/promývacího roztoku
- Přenesení vzorků do S-Trap™ 96-well Micro Plate
- Zachycení proteinů
- Promytí a odstranění kontaminantů
- Přidání proteázy
- Digesce přímo v destičce
- Eluce peptidů
- Zakoncentrování a příprava pro LC-MS/MS
Technické specifikace
- Počet současně zpracovaných vzorků: až 96
- Množství celkového proteinu: 1–100 µg na jamku
- Maximální deklarované množství: ≤100 µg proteinu na jamku
- Kapacita jamky: přibližně 400 µL
- Standardní centrifugace: 2 000 × g po dobu 2 min
- Alternativní způsob průtoku: vakuum nebo pozitivní tlak
- Standardní promývání: 250 µL Binding/Wash Solution, 3×
- Objem proteázového roztoku: 20 µL
- Doporučený poměr proteázy k proteinu v protokolu: 1:10 (w/w)
- Digesce: celkem 2 h při 47 °C
- První eluce: 40 µL Digestion Solution
- Druhá eluce: 40 µL Elution Solution
- Volitelná třetí eluce: 40 µL 50% ACN / 0,2% kyselina mravenčí pro hydrofobní peptidy
- Downstream analýza: LC-MS / LC-MS/MS
- Automatizace: kompatibilní s vybranými 96jamkovými automatizačními systémy
- Určení: Research Use Only – není určeno pro diagnostické postupy
Dostupné varianty
- PN P002-96MCR-0001PL – 1× S-Trap™ 96-well Micro Plate
- PN P002-96MCR-0003PL – 3× S-Trap™ 96-well Micro Plate
- PN P002-96MCR-0010PL – 10× S-Trap™ 96-well Micro Plate
Volitelný Accessory Pack
ProtiFi nabízí také S-Trap™ 96-well Micro Plate with Accessory Pack, PN P002-96MCR-0001AP, který obsahuje:
- 1× S-Trap™ 96-well Micro Plate
- 1× 2,0mL 96jamkovou odpadní destičku
- 1× 1,0mL 96jamkovou sběrnou destičku
- 1× silikonovou podložku / uzávěr.
Samostatné S-Trap™ 96-well Micro Plates neobsahují pracovní roztoky. Pro kompletní workflow s předpřipravenými roztoky je určena samostatná varianta S-Trap™ 96-well Micro Kit.
