Using the Waters Forensic Toxicology Screening Application Solution With UNIFI to Determine Diuretics in Urine

Význam tématu

Diuretika se běžně využívají v medicíně k léčbě srdečního selhání a hypertenze, zároveň jsou zneužívána ve sportu pro rychlou redukci hmotnosti a maskování zakázaných látek. Světová antidopingová agentura (WADA) zakazuje jejich použití a stanovuje hodnotu MRPL 200 ng/mL pro zajištění konzistentní detekce napříč laboratořemi.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo rozšířit Forensic Toxicology Screening Application Solution s UNIFI o schopnost detekovat a kvantifikovat diuretika ionizující v negativním módu, a to až pod úroveň MRPL. Studie demonstruje aplikaci této metody na kontrolované i autentické vzorky moči.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky moči byly připraveny precipitací acetonitrilem s interním standardem ioxinyl. Analýza probíhala na UPLC I-Class systému s ACQUITY HSS C18 kolonkou (50 °C) při průtoku 0,4 mL/min a gradientu vody/acetonitrilu s 0,001 % formiové kyseliny. Detekce se prováděla na Xevo G2-S QTof v módu MS E s negativní elektrospray ionizací (ESI-), rozsah m/z 50–1000, referenční hmotností leucine enkephalinu.

Hlavní výsledky a diskuse

Bylo validováno 16 diuretik, včetně pěti sloučenin ionizujících pouze v neg. módu, s retenčními časy 1,7–4,1 min. Pozitivní identifikace vyžadovala odchylku retenčního času do ±0,35 min, přesnost m/z do 5 ppm a nejméně jeden diagnostický fragment z vysoké energie. Metoda umožňuje rozlišení izobarických sloučenin (např. metolazon vs. indapamid) na základě fragmentačních spekter. Kalibrační křivky v rozsahu 0–2000 ng/mL (1/x vážený kvadratický fit) dosáhly korelačního koeficientu >0,99. Analýza autentického vzorku prokázala přítomnost furosemidu a jeho glukuronidního metabolitu.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a spolehlivé screeningové stanovení diuretik v souladu s WADA MRPL.
• Komplexní identifikace a kvantifikace díky MS E fragmentům.
• Rozšíření databáze o nové metabolity prostřednictvím UNIFI Met ID nástrojů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze dále rozšířit o další skupiny látek, automatizovat datové zpracování pro vysokou propustnost a využít MS E fragmentační přístupy v metabolomické a toxikogenomické oblasti.

Závěr

Popisovaný postup nabízí citlivou, robustní a univerzální platformu pro analýzu diuretik v moči, která splňuje anti-dopingové požadavky a zvyšuje důvěryhodnost výsledků díky fragmentačním datům a identifikaci metabolitů.

Reference

1. World Anti-Doping Agency. The World Anti-Doping Code: The 2015 Prohibited List. 2015.
2. World Anti-Doping Agency. Minimum Required Performance Levels for Detection and Identification of Non-Threshold Substances, TD2013MRPL. 2013.
3. Wood M. The Utility of MS E for Toxicological Screening. Waters Technology Brief. 2010.
4. Roberts M., Wood M. Analysis of Beta-Blockers using UPLC with Accurate Mass Screening. Waters Application Note. 2014.
5. Waters Corporation. Forensic Toxicology Screening Application Solution. Waters Brochure.