RAPID UPLC-MS/MS DRIED BLOOD SPOT ANALYSIS OF STEROID HORMONES USING THE XEVO TQ-S MICRO FOR CLINICAL RESEARCH

Význam tématu

Dried Blood Spot (DBS) představuje rychlý a minimálně invazivní přístup k odběru vzorků pro analýzu steroidních hormonů. Tento formát usnadňuje přepravu a skladování, redukuje objem biologického materiálu a umožňuje širší nasazení v klinickém výzkumu a screeningových programech.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zabývá vývojem a validací vysoce výkonné UPLC-MS/MS metody pro kvantifikaci androstenedionu, 17-hydroxyproges­teronu, kortizolu, 11-deoxykortizolu a 21-deoxykortizolu v DBS. Hlavním cílem bylo dosáhnout vysokého průtoku, analytické citlivosti a reprodukovatelnosti pro potřeby klinického výzkumu.

Použitá metodika a instrumentace

Práce zahrnovala následující kroky:

• Příprava vzorků: 2 kružnice (3 mm) DBS na 96-jamkovou destičku, přidání interních standardů, extrakce methanolem a vodou, SPE Oasis MAX µElution.
• Automatizace: Tecan Freedom EVO 100 pro manipulaci se vzorky.
• Chromatografie: Waters ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou CORTECS C18 2.7 µm (2,1 × 50 mm) a předkolonkou VanGuard.
• Detekce: Waters Xevo TQ-S micro v pozitivním ESI módu, režim Multiple Reaction Monitoring.
• Podmínky: Gradient methanol – 0,05 mM ammonium fluoridu, doba analýzy ~2,3 minuty/injekce.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Výbornou separaci: baseline rozlišení izobarických steroidů.
• Lineární kalibrace: rozsah 0,5–500 ng/mL (androstenedion, 11-deoxykortisol), 1–500 ng/mL (17-OHP, kortizol, 21-deoxykortisol), r2 > 0,995.
• Nízkou LLOQ: 0,5 ng/mL pro androstenedion a 11-deoxykortisol, 1 ng/mL pro ostatní hormony.
• Vysokou přesnost a přesnost: celková preciznost ≤ 9,3 %, přesnost QC 94,2–110,1 %.
• Vysoký průtok: zpracování až 384 DBS vzorků za ~18 hodin.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená workflow umožňuje rychlou a spolehlivou kvantifikaci klíčových steroidních hormonů z DBS, což zlepšuje logistiku sběru a skladu vzorků, snižuje potřebu objemných odběrů a zrychluje data reporting v klinických studiích a screeningových programech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj v oblasti:

• Multiplexních panelů pro širší spektrum metabolitů.
• Miniaturizovaných a přenosných MS systémů pro terénní nasazení.
• Pokročilých algoritmů pro zpracování dat a automatizovanou interpretaci výsledků.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda pro DBS vzorky poskytuje vysokou citlivost, selektivitu i průtok potřebný pro klinický výzkum steroidních hormonů. Robustní výkon a jednoduchá automatizace z ní činí efektivní nástroj pro rozsáhlé studie i rutinní aplikace.

Reference

Foley D., Calton L. J. Rapid UPLC-MS/MS dried blood spot analysis of steroid hormones using the Xevo TQ-S micro for clinical research. Waters Corporation, 2019.