The detection and analytical confirmation of synthetic fentanyl analogues in human urine and serum using an Agilent Ultivo LC/TQ

Význam tématu

V oblasti forenzní a klinické toxikologie představují syntetické analogy fentanylu významnou hrozbu díky své vysoké toxicitě a rozmanitosti chemických struktur. Rychlá a citlivá analýza těchto látek v biologických matricích je zásadní pro monitorování expozice, diagnostiku předávkování a podporu soudně-lékařských vyšetření.

Cíle a přehled studie / článku

Tento Application Note popisuje vývoj cílené LC-MS/MS metody pro kvantifikaci 12 syntetických opioidů fentanylové třídy, prekurzoru 4-ANPP a experimentálního analogu W-18 v lidské krvi (sérum) a moči. Hlavním cílem byla optimalizace jednoduché přípravy vzorků, dosažení nízkých mezí kvantifikace a ověření přesnosti, opakovatelnosti a linearity metody.

Použitá instrumentace

• LC systém: Agilent 1290 Infinity II pumpa, autosampler a vícekolonový termostat
• Kolona: Agilent Poroshell 120 EC-C18, 2,1 × 50 mm, 2,7 µm
• MS detektor: Agilent Ultivo Triple Quadrupole Mass Spectrometer s ESI
• Software: Agilent MassHunter C.01.00 a MassHunter Optimizer pro výběr MRM přechodů

Použitá metodika

Analýza vyžaduje minimální přípravu:

• Sérum: 250 µL vzorku se vpipetuje s deuterovaným interním standardem, agreguje se 500 µL studeného acetonitrilu, odstředí (5 000 rpm) a supernatant se ředí metanol-voda (1:2)
• Moč: negativa se doplní interními standardy, odstředí při 4 °C a do výsledného 1 mL doplní vodou
• Kvantifikace: 12 kalibračních úrovní od 1 pg/mL do 500 ng/mL pro sérové vzorky, od 1 pg/mL do 500 ng/mL pro moč
• Gradientní eluční program: 0–7 min, organická složka 10–95 % při průtoku 0,4 mL/min
• MRM režim: pozitivní ionizace, zdrojová teplota 325 °C, průtok plynu 9–11 L/min, napětí 3 500 V

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Výbornou linearitu (R2 > 0,996 až > 0,999) napříč širokým rozsahem koncentrací
• Meze kvantifikace (LLOQ) 10–50 pg/mL v séru a 50–100 pg/mL v moči
• Reprodukovatelnost: %RSD < 7 % v séru a < 9 % v moči
• Krátkou dobu analýzy 7 minut za běžného provozu

Chromatogramy a kalibrační křivky potvrdily schopnost současně detekovat a kvantifikovat všechny cílové látky, včetně karfentanilu, U-47700 a W-18.

Přínosy a praktické využití metody

Tato robustní a citlivá LC-MS/MS metoda umožňuje laboratorním oddělením forenzních, klinických i regulačních orgánů:

• Spolehlivě monitorovat přítomnost nových fentanylových analogů
• Podpořit vyšetřování předávkování a nelegální výroby
• Implementovat rychlý screening a kvantitativní analýzu v rutině QA/QC

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj metody může zahrnovat:

1. Rozšíření panelu o nově objevené opioidní analogy a jejich metabolity
2. Optimalizaci přípravných postupů pro složitější matrice (např. tkáně, vlasy)
3. Implementaci vysokorychlostních cílených metod v kombinaci s hrubým screeningem HRMS
4. Vývoj automatizovaných workflow pro vyšší propustnost a nižší riziko kontaminace

Závěr

Popsaná metoda s Agilent Ultivo LC/TQ demonstruje vysokou citlivost, linearitu a přesnost při kvantifikaci širokého spektra syntetických opioidů v séru a moči. Díky jednoduchému vzorkovacímu protokolu a rychlému chromatografickému běhu je metoda vhodná pro každodenní forenzní a klinickou praxi.

Reference

Žádné uvedené literární zdroje.