Comparison of the 800 bar and 600 bar Agilent 1260 Infinity II Vialsampler

Význam tématu

Spolehlivé a reprodukovatelné kapalinové chromatografické systémy jsou nezbytné v regulovaných prostředích, zejména v oblasti farmaceutické analýzy, kde je jakákoli změna metody přísně kontrolována. Backward compatibility mezi staršími a novými komponentami kapalné chromatografie minimalizuje potřebu časově i finančně náročné revalidace metod.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem tohoto přehledu bylo porovnat výkonnost Agilent 1260 Infinity II Vialsampler v provedení 600 bar (G7129A) a 800 bar (G7129C) při analýze čtyř kortikosteroidů (prednisolon, prednisolon acetát, kortison, amcinonid). Studie hodnotila reprodukovatelnost, rozlišení, linearitu, citlivost a možné carryover obou variant sampleru za účelem ověření zpětné kompatibility.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Prime LC sestava: flexibilní pumpa G7104C, Vialsampler 600 bar (G7129A) a 800 bar (G7129C) s integrovaným ohřívačem kolony a chlazením vzorku (G7130-64430), Diode Array Detector WR G7115A.
• Softwarové řízení: Agilent OpenLAB CDS 2.2.
• Řešení: LC grade acetonitril, 0,1 % TFA v H2O, 0,22 µm filtrace (Milli-Q Integral).

Použitá metodika

Pro separaci kortikosteroidů byla použita kolona Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (3,0 × 100 mm, 2,7 µm) s gradientem 30→95 % acetonitrilu v 7 minutách, průtokem 0,8 mL·min⁻¹, injekčním objemem 5 µL a teplotou 30 °C. Detekce probíhala při 254/10 nm (referenční 360/100 nm).
Pro stanovení omezení detekce (LOD, S/N=3) a kvantifikace (LOQ, S/N=10) byly připraveny šestibodové kalibrace (0,5–100 ng·µL⁻¹ pro tři kyslíkaté steroidy, 1–200 ng·µL⁻¹ pro amcinonid).
Carryover měřeno vložením 1,2 µg chlorhexidinu s 3s proplachem jehlou (0,1 % TFA) na kolonu Agilent Pursuit XRs 3 C18 (2,0 × 50 mm) v isokratickém módu 40 % acetonitrilu.

Hlavní výsledky a diskuse

Obě varianty sampleru dosáhly vynikající retenční a plošné přesnosti (RT RSD ≤ 0,03 %, Area RSD ≤ 0,15 %) a srovnatelného rozlišení (3,1–46,3). Linearita kalibrace dosáhla R2 ≥ 0,99996 a LOD/LOQ se pohybovaly v rozmezí 0,17–0,37 ng a 0,57–1,24 ng. Analýzy carryover neprokázaly žádné pozůstatky chlorhexidinu po následující blank injekci u obou samplerů.

Přínosy a praktické využití metody

Prokázaná ekvivalence umožňuje bezproblémový přenos existujících metod z 600 bar sampleru na nové 800 bar provedení bez nutnosti revalidace. Laboratoře tak mohou rozšířit rozsah provozního tlaku a zároveň zachovat validitu a konsistenci výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšířený tlakový rozsah až do 800 bar otevírá cestu k aplikacím náročnějším na separaci, včetně analýzy peptidů, proteinů a dalších biomolekul. Integrace s hmotnostní spektrometrií a automatizovaným workflow může dále zvýšit výkon a flexibilitu analytických laboratoří.

Závěr

Agilent 1260 Infinity II Vialsampler 800 bar prokázal srovnatelnou výkonnost s 600 bar verzí ve všech hodnocených parametrech. Jeho implementace přináší vyšší tlakový rozsah, aniž by byla nutná revalidace metod, což usnadňuje modernizaci chromatografických systémů.

Reference

1. U.S. FDA. Guidance for Industry: Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics, July 2015.