Analysis of Veterinary Drugs in Meat with the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Kontrola reziduí veterinárních léčiv v mase je zásadní pro ochranu veřejného zdraví, předcházení antimikrobiální rezistenci a zajištění souladu s legislativními limity. Robustní a citlivé analytické metody umožňují efektivní monitorování stovek různých sloučenin v krátkém čase.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a vysoce multiplexní metodu pro stanovení 120 veterinárních léčiv v hovězím mase pomocí UHPLC-MS/MS na přístrojích Agilent 1290 Infinity II a 6495 Triple Quadrupole. Analytický běh trvá 12 minut, detekční limity dosahují 0,1–2 ng/mL a kvantifikační limity 0,1–5 ng/mL.

Použitá metodika a instrumentace

Pro extrakci vzorků jater a ledvin byla využita sorpční kazeta EMR-Lipid, která selektivně odstraňuje lipidy. Následná chromatografie probíhá na Agilent 1290 Infinity II s kolonou ZORBAX C-18 (150 × 2,1 mm, 1,8 μm), gradient běží s mobilní fází voda + 0,1 % kyseliny mravenčí a acetonitril, průtok 0,5 mL/min, teplota 30 °C, injekce 15 μL. Detekce je prováděna na Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS v režimu simultánní pozitivní a negativní ionizace s technologií iFunnel a JetStream. Pro většinu sloučenin byly optimalizovány tři MRM tranzice.

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky prokázaly:

• Oddělení širokého spektra třinácti tříd látek během 12minutového běhu.
• LOD pro 89 sloučenin ≤0,1 ng/mL, LOQ pro 61 sloučenin ≤0,1 ng/mL, všechny pod legislativními limity.
• Intra- a interdenní opakovatelnost RSD <15 % u více než 90 % analyzovaných látek.
• Linearity R2 >0,99 ve více než 85 % případů i při nízkých koncentracích a při kalibraci navázané na toleranční limity.
• Možné matriční interferenty detekovány a eliminovány díky poměru iontových tranzic (příklad cimaterolu v játrech).

Přínosy a praktické využití metody

Tato metoda umožňuje vysokoprůchodní screening více než stovky veterinárních léčiv v mase v jediné analýze, splňuje požadavky regulačních orgánů USA, EU i dalších regionů, zajišťuje nízké náklady na interní standardy a lze ji snadno implementovat v rutinních kontrolních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry rozvoje:

• Rozšíření na další potravinové matrixy (mléko, ryby).
• Automatizované extrakční postupy a integrace robotických systémů.
• Nástup HRMS (Q-TOF, Orbitrap) pro doplňkovou nestandardní analýzu.
• Databázové platformy pro online sledování trendů reziduí a predikci rizik.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda umožňuje spolehlivou, rychlou a citlivou analýzu 120 veterinárních léčiv v mase, splňuje regulační požadavky, poskytuje vynikající opakovatelnost, linearitu a selektivitu a je vhodná pro rutinní i výzkumné účely.

Reference

• Martinez J. L. Environmental pollution by antibiotics and by antibiotic resistance determinants. Environmental Pollution 157(11), 2893-2902 (2009).
• European Commission Decision implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (2002).
• CFR Title 21 - Food and Drugs, Part 556 Tolerances for residues of new animal drugs in food. United States Food and Drug Administration (2015).
• Health Canada Administrative Maximum Residue Limits (AMRLs) and Maximum Residue Limits (MRLs) set by Canada (2012).
• Han L., et al. Evaluation of a recent product to remove lipids and other matrix co-extractives in the analysis of pesticide residues and environmental contaminants in foods. J. Chromatogr. A 1449, 17-29 (2016).
• Lucas D., Zhao L. PAH Analysis in Salmon with Enhanced Matrix Removal. Agilent Technologies Application Note 5991-6088EN (2015).
• Zhao L., Lucas D. Multiresidue analysis of veterinary drugs in bovine liver by LC/MS/MS. Agilent Technologies Application Note 5991-6096 (2015).
• Anumol T., et al. Analysis of 122 Veterinary Drugs in Meat Using All Ions MS/MS with an Agilent 1290/6545 UHPLC-Q-TOF System. Agilent Technologies Application Note 5991-6651EN (2016).
• Schneider M. J., Lehotay S. J., Lightfield A. R. Evaluation of a multi-class, multi-residue LC-MS/MS method for analysis of 120 veterinary drugs in bovine kidney. Drug Testing and Analysis 4, 91-102 (2012).