Scaled Separation of Nine Water‑Soluble Vitamins on the Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB‑Aq Column

Význam tématu

Přesné stanovení vodou rozpustných vitamínů skupiny B je klíčové pro kontrolu kvality potravin a doplňků stravy. Rozvoj vysoce výkonné kapalinové chromatografie (UHPLC) s povrchně porézními částicemi přináší zkrácení analýz, úsporu rozpouštědel a zlepšenou selektivitu.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřuje na geometrické škálování gradientní separace devíti vitamínů B prostřednictvím Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-Aq kolon o třech velikostech částic (1,9; 2,7; 4 µm). Cílem bylo zachování poměru délky kolony k velikosti částice (L/dp) a výměna mezi rychlostí, rozlišením a provozním tlakem při různých konfiguracích.

Použitá metodika a instrumentace

Analýzu prováděl Agilent 1290 Infinity II LC systém modifikovaný na nízkou objemovou disperzi s:

• Flexibilním čerpadlem (G7104A) a odvzdušňovačem
• Vialsamplerem (G7129B) s automatickým dávkovačem a 20 µL hlavou
• Integrovaným komorovým termostatem (G7130A)
• Diodovým array detektorem (G7117B) při 260 nm, 80 Hz
• Software Agilent MassHunter LC/MS Data Acquisition pro Ultivo LC/TQ
• Poroshell 120 SB-Aq kolony: 2,1×50 mm, 1,9 µm; 3,0×100 mm, 2,7 µm; 4,6×150 mm, 4,0 µm

Mobilní fáze: voda (A) a acetonitril (B) s 200 mM fosfátovým pufrem + 1 % kyseliny fosforové (D, pH ~2). Gradient 0–30 % B v 3/6/12 minutách (pro odpovídající velikost částic). Teplota kolony 70 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

U všech tří velikostí částic byla dosažena obdobná selektivita a oddělení devíti B vitamínů, přičemž menší částice (1,9 µm) přinesly nejrychlejší analýzu (3 min) a nejnižší spotřebu rozpouštědel, ovšem za nejvyššího provozního tlaku (Pmax 220 bar). Kolony s většími částicemi (2,7 a 4,0 µm) nabízí nižší tlak (Pmax 280 a 245 bar) a odolnější vstupní fritky.

Přínosy a praktické využití metody

• Flexibilní přenos metod mezi systémy s různými požadavky na tlak a objem
• Úspora času a rozpouštědel při analýzách vysoce průtokových systémů
• Možnost optimalizace podle situace – vyšší rozlišení, rychlost nebo odolnost kolony

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další snižování velikosti povrchně porézních částic pod 1,5 µm pro zvýšení účinnosti a rychlosti UHPLC. Integrace s hmotnostní spektrometrií a automatizované vysokopropustné testování umožní širší využití v potravinářství, farmaceutickém a klinickém sektoru.

Závěr

Geometrické škálování Agilent Poroshell 120 SB-Aq kolony na různých velikostech částic zachovává selektivitu, přičemž umožňuje uživatelům volbu mezi rychlostí, tlakem a odolností vůči ucpávání. Tím se zvyšuje flexibilita metod a efektivita laboratorní práce.

Reference

1. Gratzfield-Huesgen A.; Naegele E. Maximizing Efficiency Using Agilent Poroshell 120 Columns, Agilent Technologies Application Note, 5990-5602EN, 2016.
2. Meyer V. R. Practical High-Performance Liquid Chromatography, 4th Edition, Wiley, 2004, p. 34.