Efficient Quantitative Analysis of THC and its Metabolites in Whole Blood Using Agilent Captiva EMR—Lipid and LC-MS/MS

Význam tématu

Efektivní extrakce a kvantitativní analýza THC a jeho metabolitů v celkové krvi je klíčová pro forenzní laboratoře, kde složitost biologických matric vede k matričním efektům a kontaminaci analyzátorů. Odstranění fosfolipidů výrazně zlepšuje citlivost, selektivitu a spolehlivost LC-MS/MS měření.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této aplikace bylo vyvinout rychlý a jednoduše proveditelný postup pro izolaci Δ9-THC, 11-hydroxy-Δ9-THC a 11-nor-9-karboxy-Δ9-THC z whole blood pomocí in-well precipitace (PPT) následované selektivní eliminací fosfolipidů prostřednictvím Agilent Captiva EMR—Lipid a jejich kvantitativní stanovení LC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika sample preparation spočívala v aktivní in-well precipitaci chlazeným roztokem MeOH:ACN (15:85), přidání diluce vodou, propuštění vakuu skrze Captiva EMR—Lipid cartridge, evaporaci eluátu a rekonstituci v MeOH s 0,1% kyselinou mravenčí. Analýza probíhala pomocí gradientní LC na Agilent 1290 Infinity systému a MRM detekce na Agilent 6490 Triple Quadrupole.

• In-well PPT: 500 µL MeOH:ACN (15:85), 100 µL whole blood, aktivní míchání, vakuu 3,5–4 psi.
• Přidání 200 µL H2O:ACN (1:4) a dokončení propuštění při 11–13 psi.
• Evaporace a rekonstituce v 100 µL MeOH (0,1% FA); online ředění (5 µL + 10 µL vody).

Použitá instrumentace

• Agilent Captiva EMR—Lipid 1 mL cartridge
• Agilent 1290 Infinity LC System s kolonkou ZORBAX RRHD Bonus RP 2.1×50 mm, 1.8 µm
• Agilent 6490 Triple Quadrupole LC/MS (ESI+)
• Agilent MassHunter Software pro řízení a zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Pomocí EMR—Lipid bylo odstraněno až 97 % fosfolipidů z celkové krve, přičemž obnovy THC a metabolitů dosáhly 92–103 % (RSD < 11,5 %). Kalibrační křivky vykázaly linearitu v rozsahu 0,5–100 ng/mL (R2 > 0,99) a LOQ ≤ 1 ng/mL. Metoda prokázala vysokou reprodukovatelnost a stabilitu napříč třemi experimentálními dny.

Přínosy a praktické využití metody

Postup minimalizuje potlačení signálu způsobené matricí, snižuje riziko kontaminace LC-MS/MS systému a zkracuje celkový čas přípravy vzorku. Umožňuje spolehlivou forenzní kvantifikaci THC na úrovních relevantních pro posouzení intoxikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření do 96-jamkového formátu pro vysokopropustnou automatizaci, adaptace na další lipofilní sloučeniny a aplikace v klinické a environmentální analýze otevírají nové příležitosti pro robustní screeningové a kvantitativní metody.

Závěr

Navržená metoda kombinuje jednoduchost in-well PPT s účinným odstraněním fosfolipidů pomocí Agilent Captiva EMR—Lipid a poskytuje citlivou, reprodukovatelnou a rychlou forenzní analýzu THC a jeho metabolitů v celkové krvi.

Reference

• Matuszewski B. K.; Constanzer M. L.; Chavez-Eng C. M. Strategies for the Assessment of Matrix Effect in Quantitative Bioanalytical Methods Based on HPLC-MS/MS. Anal. Chem. 2003, 75, 3019–3030.
• Jamey C.; et al. Determination of Cannabinoids in Whole Blood by UPLC-MS/MS. J. Anal. Toxicol. 2008, 32, 349–354.
• Stevens J.; Zhao L. Efficient Quantitative Analysis of THC and Metabolites in Human Plasma Using Captiva EMR—Lipid by LC-MS/MS. Agilent Technologies Application Note 5991-8636, 2017.
• Elian A.; Hackett J. Solid-Phase Extraction and Analysis of THC and Carboxy-THC from Whole Blood Using a Novel Fluorinated Solid-Phase Extraction Sorbent and Fast LC-MS/MS. J. Anal. Toxicol. 2009, 33, 461–468.
• Sorensen L.; Hasselstrom J. Sensitive Determination of Cannabinoids in Whole Blood by LC–MS/MS After Rapid Removal of Phospholipids by Filtration. J. Anal. Toxicol. 2017, 41, 382–391.