Isolate and Reanalyze Pharma Impurities with the Agilent 1290 Infinity II Autoscale Preparative LC/MSD System

Význam tématu

Izolace a charakterizace organických nečistot ve farmaceutických vzorcích je klíčová pro zajištění kvality léčivých přípravků. Degradace a meziprodukty syntézy mohou ovlivnit účinnost a bezpečnost finálního produktu. Zefektivnění workflow izolace, sběru a opětovné analýzy nečistot přispívá k rychlejšímu vývoji a validaci látek.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo předvést kompletní postup čištění a analýzy malých molekul pomocí jediného přístrojového řešení Agilent 1290 Infinity II Autoscale Preparative LC/MSD. Klíčové kroky zahrnují vývoj analytické metody, převedení na preparativní podmínky, sběr frakcí a jejich následnou reanalýzu bez manuálních zásahů.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika začala optimalizací gradientu na analytické kolonce C18 s objemem injekce 10 až 50 μl. Převedení na preparativní režim proběhlo pomocí kalkulátoru pro udržení zachování retenčních časů při průtoku až 32 ml/min a objemu vzorku do 3 ml. Sběr frakcí byl řízen UV signálem (254 nm) s nastavením prahu a rychlosti změny signálu. K opětovné analýze byly frakce homogenizovány autosamplerem a injikovány na analytický LC/MSD.
Instrumentální vybavení:

• Agilent 1290 Infinity II Preparative Binary Pump
• Agilent 1260 Quaternary Pump
• Agilent 1290 Preparative Open-Bed Sampler/Collector
• Agilent 1260 Diode Array Detector a Variable Wavelength Detector
• Agilent 1290 Preparative Column Compartment a Valve Drive
• Agilent InfinityLab LC/MSD XT s ESI zdrojem
• Softwarové řízení a zpracování dat v Agilent OpenLab CDS ChemStation

Hlavní výsledky a diskuse

Při analýze zhoršeného vzorku ibuprofenu se na analytické chromatogramu objevilo několik neznámých píků. Převedení do preparativního režimu zachovalo rozlišení a umožnilo izolovat deset frakcí. Reanalýza odhalená nízkou čistotu frakcí 2, 3 a 8 (45–70 %), které nebyly zřejmé při analytickém sledování. Hmotnostní spektra napovídají přítomnost ibuprofenaldehydu a dalších degradačních produktů. Výsledky potvrzují nezbytnost kontroly čistoty každé frakce.

Přínosy a praktické využití metody

Integrovaný systém eliminuje přenos vzorků mezi přístroji a minimalizuje manuální kroky, čímž zkracuje dobu analýzy a snižuje riziko chyb. Automatizovaná homogenizace a opětovná injekce frakcí zvyšuje spolehlivost kvantifikace i kvalitativního hodnocení nečistot.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se očekává v oblasti pokročilé automatizace a umělé inteligence pro návrh a optimalizaci metod. Integrace vysoce rozlišené hmotnostní spektrometrie, mikroprůtokových technologií a zelených rozpouštědel zvýší efektivitu a udržitelnost purifikačních procesů.

Závěr

Příklad použití Agilent 1290 Infinity II Autoscale Preparative LC/MSD prokázal, že přechod z analytické na preparativní fázi, sběr a reanalýza frakcí lze provést na jediném systému s minimálním uživatelským zásahem. Tento přístup zlepšuje kvalitu izolace nečistot a zkracuje čas potřebný k potvrzení čistoty.

Reference

• Guillarme D., Rudaz S., Veuthey J.-L. Eur. J. Pharm. Biopharm. 2008, 68, 430–440.
• Spuling I., Rieck F. Spotting Fraction Impurities with More Confidence Using the Agilent 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Sampler/Collector. Agilent Technologies Technical Overview 2019, 5994-1643EN.