Highly-Sensitive Detection of Multiple Porcine-Specific Peptides in Processed Foods by LC/MS/MS Method

Význam tématu

Potraviny mohou obsahovat nepovolené přísady, což je zásadní problém z hlediska kvality, ekonomiky a náboženských požadavků. Pro muslimské a židovské komunity je klíčové zajistit Halal/Haram integritu potravin i po tepelném zpracování.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje vývoj a validaci vysoce citlivé LC/MS/MS metody pro detekci tepelně stabilních, vepřových specifických peptidů v potravinových výrobcích. Cílem bylo zkombinovat známé peptidové markery do jediné MRM („multiple reaction monitoring“) analýzy, umožňující rychlou a spolehlivou kontrolu halal potravin.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Nexera X2
• Triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr LCMS-8060
• Reverzní fáze Aeris Peptide XB-C18 (150×2,1 mm, 1,7 µm)
• SPE kazety pro čistění štěpených proteinů

Metodika

Vzorky (1 g masa nebo potraviny) byly extrahovány v denaturačním pufru (urea, thiourea, Tris-HCl), potom proběhla redukce DTT, alkylace iodoacetamidem a tryptické štěpení přes noc při 37 °C. Po SPE čištění následovala LC/MS/MS analýza v režimu MRM, přechody a kolizní energie navržené v Skyline a optimalizované v LabSolutions. Pro ověření odolnosti peptidů proti teplu byly vzorky před analýzou zahřívány na 200 °C po dobu 30 min.

Hlavní výsledky a diskuse

• Bylo cíleno sedm vepřových specifických peptidů z troponinu T, myosinu a laktátdehydrogenázy.
• Metoda detekuje vepřové peptidy již od 0,1 % přídavku tepelně ošetřeného masa (200 °C, 30 min) v halal matričních maticích.
• Halal kontrolní vzorky byly negativní, zatímco v nehalal potravinách byly peptidy potvrzeny.
• Specifičnost ověřena na hovězím a kuřecím mase; jediný překryvný signál u LVVI byl rozlišen unikátním fragmentačním iontem.
• Linearity semi-kvantifikace pro čtyři peptidy (>0,995) a opakovatelnost (RSD < 16 %) v rozsahu 0,1–5 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší robustní řešení pro rutinní kontrolu halal potravinářských produktů díky vysoké citlivosti, selektivitě a odolnosti vůči tepelnému zpracování. Umožňuje laboratořím rychle a spolehlivě detekovat i nízké hladiny vepřových komponent.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na širší spektrum potravinových matic a rychlejší přípravné protokoly.
• Automatizace a integrace s mikrofluidními systémy.
• Vývoj standardizovaných referenčních peptidových materiálů.
• Přenosné hmotnostní spektrometry pro on-site halal kontrolu.

Závěr

LC/MS/MS metoda na platformě LCMS-8060 nabízí vysoce citlivou, selektivní a tepelně odolnou detekci vepřových peptidů, čímž poskytuje spolehlivý nástroj pro ověření halal integrity zpracovaných potravin.

Reference

1. N. A. Fadzlillah et al., 2nd Int. Conf. Humanities, 2011, 159–163.
2. M. E. Ali et al., Food Anal. Methods, 2012.
3. S. Soares et al., Meat Sci. 2013, 94:115–120.
4. D. Kesuma et al., Application News AD-0120, Shimadzu, 2016.
5. C. von Bargen et al., J. Agric. Food Chem., 2013, 61:11986–11994.
6. C. von Bargen et al., J. Agric. Food Chem., 2014, 62:9428–9435.
7. S. Sarah et al., Food Chem., 2016, 199:157–164.
8. A. J. Barnes et al., ASMS 2015, WP099.