Tomorrow’s quantitation: increased robustness for quantitation of immunosuppressant drugs in blood with the TSQ Fortis MS for clinical research

Význam tématu

Monitorování hladin imunosupresivních léků v krevním matrice je klíčové pro optimalizaci terapie transplantovaných pacientů a výzkum nových léčebných postupů. Vyžaduje vysoce citlivé a specifické analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní, spolehlivý a reprodukovatelný postup pro kvantitativní analýzu cyklosporinu A, takrolimu, sirolimu a everolimu v plné krvi pomocí UHPLC v kombinaci s triple kvadrupólovou hmotnostní spektrometrií QqQ MS.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plné krve byly připraveny precipitací pomocí roztoku ZnSO4 v methanolu s interními standardy cyklosporinem D a askomycinem. Analýza probíhala na Vanquish Flex Binary UHPLC s kolonkou Hypersil GOLD C8 (50×2,1 mm, 5 µm) při 75 °C. Mobilní fáze A byla voda s 10 mM formiátu amonného a 0,1 % kyseliny mravenčí, fáze B byla methanol. Gradient trval tři minuty. Spektrometr TSQ Fortis pracoval v režimu pozitivního HESI se statickým napětím 3000 V, teplotami 300 °C (ion transfer tube) a 325 °C (vaporizer) a optimalizovanými kolizními energiemi a nastavením tubového objektivu pro každý analyte. Získaná data byla zpracována v softwaru TraceFinder 4.1.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou přesnost a opakovatelnost s relativními standardními odchylkami 4 až 6 % při 2077 injekcích za šest dní. Linearita v rozsahu 2–60 µg/L (u cyklosporinu A 26–1700 µg/L) byla zachována po celou dobu, přičemž zpětné výpočty splňovaly kriterium do 20 % od teoretické hodnoty. Robustnost systému byla potvrzena stabilitou výkonu před a po čištění ionizační trubice.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a selektivita pro komplexní matrici plné krve
• Rychlá analýza s vysokou propustností vzorků
• Vynikající reprodukovatelnost a robustnost při dlouhodobém provozu
• Vhodné pro klinický výzkum, terapeutický monitoring a QA/QC

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další zkracování doby analýzy, rozšíření počtu analyzovaných imunosupresiv, zvýšená automatizace přípravy vzorků a integrace s laboratorními informačními systémy. Metodu lze adaptovat pro personalizovanou medicínu a podpůrná opatření v klinické farmacologii.

Závěr

Vyvinutý kvantitativní workflow poskytuje výjimečnou robustnost, spolehlivost a citlivost, a současně umožňuje efektivní zpracování velkého množství vzorků bez časté údržby. Metoda plně vyhovuje požadavkům klinického monitoringu imunosupresiv.

Reference

RECIPE Chemicals and Instruments GmbH Munich Germany
BioreclamationIVT New York USA
Thermo Fisher Scientific