Extending the Lower Limits of Quantification of a Therapeutic Oligonucleotide Through Microflow LC-MS/MS

Význam tématu

Oligonukleotidové terapeutika představují klíčovou oblast ve vývoji léčiv s potenciálem modulace genové exprese. Citlivá a přesná kvantifikace těchto látek v biologických maticích je nezbytná pro farmakokinetické studie a bezpečnostní hodnocení.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat tradiční IP-RP LC-MS analýzu s mikroflow LC-MS metodou pro kvantifikaci antisense oligonukleotidu fomivirsen pomocí systému SCIEX QTRAP 6500+ a M5 MicroLC s OptiFlow™ Turbo V.

Použitá instrumentace

• Hmotnostní spektrometr SCIEX QTRAP® 6500+
• M5 MicroLC System s mikroflow zdrojem OptiFlow™ Turbo V
• Exion™ UHPLC s Ion Drive Turbo V™
• Kolony Phenomenex Clarity® Oligo-MS 50×2,1 mm a Phenomenex Gemini® C18 50×0,3 mm

Použitá metodika

Pro chromatografii byl použit IP-RP gradient s HFIP/DIEA v systému dvou mobilních fází, srovnané flow rates 300 µL/min versus 6 µL/min. Kvantifikace probíhala v negativním režimu ESI s MRM přechody pro multicharged ionty fomivirsenu. Adduktace Na+ a K+ byla monitorována a optimalizována na obou systémech.

Hlavní výsledky a diskuse

Mikroflow LC-MS dosáhlo výrazného zlepšení citlivosti: spodní mez kvantifikace (LLOQ) se snížila z 5 ng/mL na 1 ng/mL a detekční limit (LOD) z 2 ng/mL na 0,5 ng/mL. Signifikantně se zvýšily intenzita píků, plocha signálu a poměr signál/šum při zachování chromatografické kvality.

Přínosy a praktické využití metody

• Snížená spotřeba rozpouštědel a nižší kontaminace zdroje
• Možnost analýzy nízkokoncentrovaných vzorků
• Vyšší robustnost a delší intervaly mezi údržbami

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj mikroflow technologií pro biofarmaceutické aplikace, integrace s automatizací vzorkování, rozšíření na jiné třídy oligonukleotidů a využití umělé inteligence pro predikci adduktace a optimalizaci ionizace.

Závěr

Implementace mikroflow LC-MS na platformě SCIEX M5 s OptiFlow™ Turbo V významně rozšiřuje možnosti kvantifikace terapeutických oligonukleotidů díky vyšší citlivosti a nižší kontaminaci.

Reference

• Warren D, McCarthy S, Xiong L. Extending the Lower Limits of Quantification of a Therapeutic Oligonucleotide Through Microflow LC-MS/MS. SCIEX, 2019.