Quantitation of Limaprost, an Analogue of PGE1 in Human Plasma

Význam tématu

Limaprost je syntetický analog prostaglandinu E1 se silnými vazodilatačními a antitrombotickými účinky. Jeho přesná kvantifikace v lidské plazmě na sub-pg/mL úrovni je zásadní pro pharmacokinetické studie a bezpečnostní hodnocení při vývoji nových léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem této práce bylo navrhnout jednodušší a přitom vysoce citlivou LC-MS/MS metodu pro kvantitativní stanovení limaprostu v lidské plazmě. Studie porovnává novou jednorozměrnou chromatografii s diferenciální mobilitou iontů (DMS) na platformě QTRAP® 6500+ se standardní dvoudimenzionální LC-MS/MS analýzou.

Použitá instrumentace

• SCIEX QTRAP 6500+ LC-MS/MS systém
• SelexION+ diferenciální mobilita (DMS) device
• Shimadzu Prominence LC systém
• Kinetex C18 kolona 2,1×50 mm, 1,7 µm (Phenomenex)
• IonDrive™ Turbo V zdroj
• Software Analyst 1.6.3 a MultiQuant 3.0

Použitá metodika

Vzorky lidské plazmy byly připraveny trojstupňovou SPE extrakcí podle literatury. Chromatografie probíhala na C18 koloně při gradientním programu (95/5 1 mM acetát amonný pH 4,5 vs. acetonitril) během 15 min při průtoku 0,3 mL/min. Do MS vstupoval iont m/z 379,2→299,3 v neg. módu. SelexION+ DMS pracoval se separačním napětím (SV) a kompenzačním napětím (CoV –7,5 V) pro ortogonální filtraci iontů.

Hlavní výsledky a diskuse

Nová 1D-LC-MS/MS metoda s DMS dosahuje LLOQ 0,3 pg/mL s lineárním rozsahem 0,3–15 pg/mL (1/x vážená regrese), bez ruční korekce integrace. Mezi QC úrovněmi (0,6; 3; 12 pg/mL) byly CV<2 %. Analytický čas vzorku se zkrátil na 15 min, což je více než třikrát rychlejší než předchozí 50minutová 2D-LC/MS/MS metoda. DMS filtrací se zamezilo isobarickým a izomerickým interferencím, výrazně se zlepšila selektivita i poměr signál/šum.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou propustnost, robustnost a kompatibilitu s regulovanou bioanalýzou. Snadná instalace a odstranění SelexION+ zarízení bez narušení vakua zkracuje dobu údržby. Zkrácený čas analýzy podporuje vyšší kapacitu laboratoře a rychlejší vyhodnocení pharmacokinetických vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření přístupu diferenciální mobility může zlepšit kvantifikaci dalších nízkomolekulárních sloučenin v biologických matricích. Integrace DMS s pokročilou automatizací a online SPE by mohla dále zvýšit efektivitu a zkrátit dobu přípravy vzorků. Další vývoj v oblasti softwarové analýzy a vysokorychlostní hmotnostní spektrometrie slibuje další zlepšení citlivosti a průtoku.

Závěr

Použití jednorozměrné LC-MS/MS metody s DMS na systému QTRAP 6500+ poskytuje vysokou citlivost, selektivitu a výrazné zkrácení doby analýzy pro stanovení limaprostu v lidské plazmě. Metoda splňuje náročné požadavky pharmacokinetických a bioanalytických studií, zvyšuje efektivitu a minimalizuje interferenční signály.

Reference

1. Komaba J, Masuda Y, Hashimoto Y, Nago S, Takamoto M, Shibakawa K, Nakade S, Miyata Y. Ultra sensitive determination of limaprost, a prostaglandin E1 analogue, in human plasma using on line two-dimensional reversed-phase liquid chromatography–tandem mass spectrometry. J Chromatogr B. 2007;852:590–7.
2. Park YS, Park JH, Kim SH, Lee MH, Lee YS, Yang SC, Kang JS. Pharmacokinetic characteristics of a vasodilatory and antiplatelet agent, limaprost alfadex, in the healthy Korean volunteers. Clin Appl Thromb Hemost. 2010;16:326–33.