Determination of Fatty Acid Methyl Esters (FAMEs) in Salmon Oil Using Automated Sample Preparation

Význam tématu

Automatizovaná příprava vzorků mastných kyselin představuje klíčový prvek v oblasti potravinářské a farmaceutické analýzy. Převod mastných kyselin na metylestery (FAME) odstraňuje chromatografické artefakty a výrazně zlepšuje opakovatelnost a přesnost stanovení zejména vysoce nenasycených kyselin, jako jsou EPA a DHA, které jsou zásadními indikátory kvality olejů z lososa.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat využití automatizovaného pracoviště Agilent 7696A Sample Prep WorkBench pro derivatizaci mastných kyselin v oleji z lososa a jejich následné kvantitativní stanovení metodou plynové chromatografie s FID detektorem. Studie se zaměřila na optimální postup přípravy vzorků, reprodukovatelnost výsledků a porovnání času přípravy vůči manuálním metodám.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorku bylo odváženo 10 mg salmonového oleje do autosamplérové vialky a naředěno 500 µl tert-butyl methyl ether (TBME). Po promíchání a přenesení 250 µl roztoku následovala derivatizace 125 µl roztoku trimethylsulfoniumhydroxidu (TMSH) při 80 °C po dobu 5 min. Celý postup byl řízený automaticky.
Instrumentace:

• Agilent 7696A Sample Prep WorkBench pro automatickou přípravu vzorků
• Agilent 6890 Series GC s kolonkou HP 88 (100 m×250 µm, 0,20 µm)
• Nosný plyn H₂, detekce FID (250 °C, H₂ 40 mL/min, vzduch 450 mL/min, N₂ 45 mL/min)

Hlavní výsledky a diskuse

Při chromatografickém rozlišení byly identifikovány všechny sledované FAME včetně hlavních EPA (retence 35,07 min, 23,7 %) a DHA (40,55 min, 20,0 %). Další zastoupené kyseliny: olejová 12 %, linolová 11 %, palmitoleinová 8 %, palmitová 4 % a stearová 5 %. Opakovatelnost měření byla vynikající: absolutní RSD ploch signálů EPA 0,51 % a DHA 0,78 %, relativní RSD koncentrací EPA 0,85 % a DHA 1,22 %. Doba automatizované přípravy byla 20 min na vzorek oproti až 2 hodinám manuální derivatizace.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace přináší výrazné zkrácení času analýzy a vysokou reprodukovatelnost bez závislosti na manuálních dovednostech operátora. Metodu lze uplatnit v kvalitativní a kvantitativní kontrole farmaceutických kapslí, potravinářských doplňků a při výzkumu lipidových profilů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávají se další inovace v oblasti plně automatizovaných linek pro vysokoprůchodové stanovení, integrace on-line datové analýzy podporované umělou inteligencí a miniaturizace reakcí pro úsporu reagencií. Dále je možné rozšíření platformy na stanovení dalších derivátů mastných kyselin a kombinaci s hmotnostní detekcí pro vyšší selektivitu.

Závěr

Ukázalo se, že automatizovaná derivatizace na Agilent 7696A výrazně zlepšuje přesnost i kapacitu analýzy mastných kyselin v salmonovém oleji a poskytuje robustní a časově úsporné řešení pro rutinní i výzkumné laboratoře.

Reference

ISO 12966-3:2009 Animal and vegetable fats and oils – Gas chromatography of fatty acid methyl esters – Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)