Automated Multiple Reaction Monitoring (MRM) Method Development for Peptide Drugs Using waters_connect for Quantitation Software

Význam tématu

Peptidové léky představují rostoucí třídu farmaceutik, jejichž kvantifikace v biologických matricích vyžaduje vysoce citlivé a selektivní metody. LC-MS/MS s MRM je standardní přístup, avšak u peptidů komplikují vývoj metod více nabité ionty. Automatizace optimalizace MRM přechodů je proto klíčová pro zvýšení efektivity a spolehlivosti.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat nástroj MRM Optimization v softwaru waters_connect pro Quantitation, který automaticky detekuje více nabitých stavů peptidů, generuje produktové ionty, optimalizuje parametry a umožňuje interaktivní hodnocení výsledků. Jako modelová látka byl zvolen semaglutid, analog GLP-1.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu standardu byl semaglutid rozpuštěn v metanolu a rozředěn 0,1% formovou kyselinou. Vzorek byl infuzován rychlostí 15 µl/min kombinovaně s mobilní fází LC (80:20 0,1% formová kyselina:acetonitril). Nástroj MRM Optimization provedl tři kroky: detekci prekurzorových iontů, objev produktových iontů a optimalizaci kolizní energie v rámci různých nabitých stavů. Výsledky se zobrazují v interaktivním grafickém prostředí.

Použitá instrumentace

• Waters Xevo TQ Absolute XR Mass Spectrometer s pozitivním režimem ESI.
• Waters_connect for Quantitation Application Manager verze 1.9.

Hlavní výsledky a diskuse

Infuze semaglutidu prokázala pět hlavních nabitých stavů ([M+3H]3+ až [M+7H]7+) s m/z 1372,01; 1029,26; 823,53; 686,47; 588,03. Automatizovaná optimalizace ukázala nejlepší kombinace prekurzorů a produktů a optimální kolizní energie pro každou nabitou formu. Interaktivní přehledy umožnily hodnocení intenzity, robustnosti a specifity přechodů. Přímý export vybraných přechodů do editoru akvizičních metod eliminoval manuální přepisovací chyby.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby vývoje MRM metod pro peptidy.
• Zvýšení přesnosti volby přechodů díky grafickým a číselným hodnocením.
• Eliminace chyb při přenosu parametrů do analytických metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření automatizace optimalizace na oligonukleotidy a proteiny, integrace umělé inteligence pro prediktivní výběr MRM přechodů a lepší propojení s LIMS a dalšími laboratorními systémy. Softwarová rozhraní se budou dále zdokonalovat pro komplexnější biomolekuly.

Závěr

Nástroj MRM Optimization v softwaru waters_connect pro Quantitation poskytuje rychlý, automatizovaný a spolehlivý přístup k vývoji kvantitativních LC-MS/MS metod pro peptidové léky. Výsledkem je vyšší efektivita, přesnost a snížení chyb.

Reference

• Plumb R, Tanna N. Automated Multiple Reaction Monitoring Method Development for Peptide Drugs Using waters_connect for Quantitation Software. Waters Corporation, Application Note, 07.11.2025.