Total protein quantification using A280

Quantifikace celkového proteinu pomocí absorbance A280

Význam tématu

Detekce celkového proteinu na základě absorpce při 280 nm je klíčová metoda v biochemii a analytické chemii, používaná při kontrole kvality vzorků, ve výzkumu a ve výrobě biotechnologických produktů.

Cíle a přehled studie / článku

Tento Application Note popisuje použití klasické aplikace Protein (Turbidity) na systémech Lunatic a Little Lunatic pro kvantifikaci proteinu (mg/mL) na základě výšky píku A280 a porovnání výsledků s přístrojem NanoDrop 2000.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá korekturu spektra o pozadí vyvolané turbidity vzorku, měření absorbance při 280 nm a výpočet koncentrace pomocí extinkčního koeficientu E1% (výchozí hodnota 10 g⁻¹ L cm⁻¹). Jako blanky slouží použitý pufr. Analýzy probíhají na systémech Lunatic a Little Lunatic, doplňková měření byla prováděna na NanoDrop 2000. Výstupy jsou k dispozici ve formátech HTML, XML, TXT, CSV a dále na Lunatic v XLSX a PDF.

Hlavní výsledky a diskuse

Softwarové rozhraní zobrazuje hodnoty koncentrace A280, korekturované spektrum a poměr A260/A280 pro posouzení čistoty vzorku (optimálně ~0,6). Nasycení měření je indikováno červenou zónou nad detekčním limitem. V kazuové studii byla osm in čnická série BSA/IgG měřena oktuplicitně na obou přístrojích, výsledky prokázaly vysokou linearitu (srovnatelné hodnoty R²) a dobrou shodu s předem stanovenými cílovými koncentracemi.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá, jednoduchá a neinvazivní kvantifikace celkového proteinu bez nutnosti barvení.
• Automatizované zpracování vzorků a generování přehledných reportů.
• Kontrola čistoty vzorku pomocí poměru A260/A280.
• Kompatibilita s běžnými laboratorními protokoly a pufry.

Budoucí trendy a možnosti využití

Směřování vývoje zahrnuje rozšíření spektrálního rozsahu měření, implementaci high-throughput analýz, integraci s laboratorními informačními systémy a využití algoritmů strojového učení pro pokročilou analýzu dat. Potenciál spatřujeme i v miniaturizaci, Internetu věcí a on-line monitoringu v bioprodukci.

Závěr

Prezentovaná metoda na systémech Lunatic a Little Lunatic poskytuje spolehlivé a přesné stanovení celkového proteinu pomocí A280, srovnatelné s NanoDrop 2000, a nabízí významné výhody v automatizaci, rychlosti a variabilitě reportování.

Reference

• Unchained Labs. Total protein quantification using A280. Application Note, 2020.