Method Migration of a Normal Phase HPLC Method for Tocopherols in Dietary Supplements

Význam tématu

Rostoucí obliba výživových doplňků vyžaduje spolehlivou analýzu obsahu vitamínu E (tocopheroly) k ověření shody s deklarovanými údaji. Fat-soluble vitamins mají odlišné chemické vlastnosti než vitaminy rozpustné ve vodě, proto je pro jejich stanovení nejvhodnější normal phase chromatografie, která však vyžaduje převedení metod mezi různými HPLC systémy.

Cíle a přehled studie / článku

Tento dokument popisuje migraci normal phase HPLC metody pro separaci a kvantifikaci čtyř tocopherolů (alpha, beta, gamma, delta) z legacy HPLC systémů (Waters Alliance e2695 a jiný dodavatel) na moderní systém Alliance iS HPLC. Hlavním cílem bylo ověřit splnění kritérií system suitability a demonstrovat následné stanovení tocopherolů v reálných vzorcích doplňků stravy.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá izokratickou normal phase chromatografii s mobilní fází hexan/ethylacetát (95:5) s přídavkem 0.05 % kyseliny octové. Kolona XBridge BEH HILIC (5 µm, 4.6×150 mm) pracuje při 40 °C, objem injekce 30 µL, průtok 1.3 mL/min a detekce UV při 295 nm. Systémy: Waters Alliance e2695, Legacy System Y, Alliance iS HPLC; detektory 2489 UV/Vis, VWD a TUV; chromatografický software Empower 3.8.0. Standardní roztok tocopherolů (0.2 mg/mL v hexanu) byl připravenředěním komerčních standardů MilliporeSigma.

Hlavní výsledky a diskuse

Při migraci metody byly přizpůsobeny komponenty systému (těsnění, ventily, hadice) a provedena výměna solventů. Na všech třech systémech byly dosaženy požadované hodnoty %RSD ploch a USP resolution dle system suitability (šestnásobné injekce). Chromatogramy prokázaly srovnatelné nebo mírně lepší rozlišení na systému Alliance iS. Metoda následně umožnila kvantitativní stanovení alpha-tocopherolu v tabletových a softgelových formulacích bez složitých přípravných kroků, pouze extrakcí hexanem.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zjednodušuje a standardizuje stanovení tukově rozpustných vitamínů v doplňcích stravy:

• Snadná migrace mezi HPLC systémy
• Minimalizace složitých přípravných postupů
• Rychlá a přímá analýza vzorků
• Vysoká reprodukovatelnost a spolehlivost výsledků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj automatizovaných přepínacích modulů pro zmáhání režimů RP/HILIC/NP, integrace s hmotnostní spektrometrií pro zlepšenou selektivitu a rozšíření aplikací na jiné tukově rozpustné látky. Vznikají také platformy pro vysokopropustný screening doplňků stravy a online sample preparation.

Závěr

Normal phase HPLC metoda pro stanovení tocopherolů byla úspěšně převedena z legacy systémů na Alliance iS HPLC. Splněné požadavky system suitability a shoda kvantitativních výsledků potvrzují použititelnost metody pro rutinní kontrolu doplňků stravy. Metoda nabízí efektivní, rychlý a spolehlivý nástroj pro QA/QC laboratoře.

Reference

1. Eric S. Grumbach a Kenneth J. Fountain, Comprehensive Guide to HILIC Hydrophilic Interaction Chromatography, Waters Corporation, 2010.
2. National Institutes of Health Office of Dietary Supplements, Vitamin E Fact Sheet, 2021.