Successful Method Migration of USP Insulin Assay to the Alliance™ iS Bio HPLC System

Význam tématu

Kompendiální LC metody představují standardní postup pro ověření shody farmaceutických přípravků s regulačními požadavky. U inzulínu, který se skládá ze dvou peptidových řetězců, je nutné spolehlivě stanovovat jak samotnou molekulu, tak její degradační produkty a biopotenci. Precizní migrace metody mezi různými chromatografickými platformami zajišťuje konzistentní výsledky a usnadňuje aktualizaci analytického vybavení.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo úspěšně přenést USP Monografii Inzulínového testu na Alliance iS Bio HPLC systém a porovnat klíčové parametry system suitability a stanovení procenta účinné látky API napříč čtyřmi HPLC systémy v jediné laboratoři. Studie zahrnovala ověření USP kritérií pro rozlišení, tailing a přesnost plochy píků u standardu a vzorku obsahujícího A–21 desamido inzulín degradant.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda byla realizována jako izokratická separace na kolonii XBridge Peptide C18 (4.6×150 mm, 5 µm) při teplotě 40 °C. Mobilní fáze byla připravena v poměru 74 % vodného roztoku A (28.4 g sulfidu sodného v 1 l vody, pH 2.3 pomocí ethanolaminu, plus 2.7 ml kyseliny fosforečné) a 26 % acetonitrilu. Objem vzorku 20 µl, detekce při 214 nm. Použité systémy:

• Alliance e2695 HPLC s UV Vis detektorem 2489
• Alliance iS Bio HPLC s TUV detektorem
• Systém Y HPLC s TUV detektorem
• Systém X Bio HPLC s DAD detektorem

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny testované systémy splnily USP kritéria rozlišení i tailingu a dosáhly požadované přesnosti plochy píků u standardu i vzorku (n=5). Alliance iS Bio HPLC systém vykázal nejnižší %RSD pro plochu píků (0.10 %) a pro retenční časy (≤ 0.15 %), což dokládá jeho vysokou stabilitu a přesnost. Variace v retenčních časech byly minimální díky optimalizaci dead volume a mimo kolonové disperze, které byly před migrací metodicky kvantifikovány.

Přínosy a praktické využití metody

Flexibilní migrace kompendiální analýzy inzulínu umožňuje laboratořím modernizovat chromatografické vybavení bez ztráty souladu s USP specifikacemi. Vylepšená preciznost a stabilita retence na novém systému zvyšuje spolehlivost rutinních QC analýz a zkracuje dobu validace metod při přechodu na moderní platformy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj směřuje k aplikaci UPLC pro zkrácení doby analýzy a lepší rozlišovací schopnosti, integraci automatizované přípravy mobilních fází a online monitoringu stability metod prostřednictvím pokročilých datových algoritmů a umělé inteligence. Miniaturizované systémy a propojení s laboratoriálními informačními systémy dále zvýší efektivitu a trasovatelnost analýz.

Závěr

USP Monografie Inzulínového testu byla úspěšně migrována na platformu Alliance iS Bio HPLC systém bez kompromisů v souladu s kompendiálními kritérii. Získané výsledky potvrzují, že přechod na moderní chromatografické systémy lze realizovat s minimálními odchylkami a s výrazným zlepšením přesnosti.

Reference

1. The United States Pharmacopeia Insulin Assay Official Bulletin 2019; insulin-rb-20190501.pdf. 2019.
2. Jenkins T McConville PR Transfer of the USP Human Insulin Related Compounds HPLC Method to the ACQUITY UPLC System Waters Application Note 720001396. 2005.
3. Dlugasch AB Gauthier L Hong P Successful Method Migration of the USP Quetiapine Fumarate Impurities Method to an Alliance iS HPLC System Waters Application Note 720007944. May 2024.