FlipLCTM. A New Method for Measuring Charged Analytes in Complex Mixtures. Part II.

Význam tématu

Analytická separace nabitých sloučenin v komplexních matricích, jako jsou potraviny nebo biologické vzorky, klade vysoké nároky na selektivitu, čas analýzy a životnost chromatografických kolon. Odstranění interferujících složek a ochrana analytické kolony jsou klíčové pro přesné kvantifikace.

Cíle a přehled studie / článku

Tato studie představuje metodu FlipLCTM, založenou na dvojitém kolonovém systému s přepínacím ventilem, který umožňuje izolovat cílové nabité analyty a minimalizovat doprovodné rušivé složky během jediné chromatografické injekce. Původní aplikace pro měření dusičnanů byla rozšířena na net derivatizované aminokyseliny, konkrétně L-Glutamin ve výživových doplňcích.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá následující zařízení a podmínky:

• Dva kolonové moduly: analytická kolona a izolační (flip) kolona přepínaná během běhu.
• HPLC systém s UV detektorem.
• Mobilní fáze: acetonitril/voda/kyselina sírová (20/80/0,05 %), gradient až na 50/50/0,50 % během 15 minut s následným držením.
• Možnost isokratického režimu pro zkrácení doby analýzy na přibližně 10 minut.

Hlavní výsledky a diskuse

Původní chromatogram bez flipování vyžadoval více než 50 minut na oddělení L-Glutaminu od aglomerované syrovátkové bílkoviny a dalších zbytkových složek. Implementací FlipLCTM došlo k výraznému zjednodušení signálu, zúžení chromatografického proudu pouze na vrchol cílové aminokyseliny a ochraně analytické kolony před kontaminací. Zkrácení analýzy na 10 minut potvrdilo vysokou účinnost izolace a reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Mezi hlavní výhody patří:

• Univerzálnost pro různé nabité kationty a anionty.
• Eliminace náročné předčištění vzorku.
• Zvýšení životnosti analytické kolony díky ochraně proti nevratným kontaminantům.
• Významné zkrácení doby analýzy.
• Možnost použití jediné metody pro rozmanité maticové typy.

Budoucí trendy a možnosti využití

V budoucnu lze metodu kombinovat s hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu, dále automatizovat přepínací postupy a rozšířit aplikace na vysoce průmyslové nebo klinické analýzy. Vyvíjejí se také odolnější kolonové materiály pro extrémní pH a teploty.

Závěr

FlipLCTM představuje robustní a efektivní přístup pro analýzu nabitých sloučenin v komplexních vzorcích, který vyžaduje minimální úpravu vzorku, zkracuje dobu analýzy a prodlužuje provozní životnost zařízení.

Reference

SIELC Technologies, Inc. FlipLC TM. A New Method for Measuring Charged Analytes in Complex Mixtures. Application Note, 2002-2018.