Quantitation of N-Nitroso Sitagliptin Impurity (NTTP) in Sitagliptin and Metformin Combination Drug Product Using the Agilent 6475 LC/TQ

Význam tématu

Detekce a kvantifikace nitrosaminových nečistot v léčivých přípravcích je zásadní pro zajištění bezpečnosti pacientů. N-nitrosositagliptin (NTTP) je potenciálně karcinogenní nečistota vznikající při výrobě nebo skladování sitagliptinu, který je součástí kombinovaného přípravku se sitagliptinem a metforminem. Evropské a americké regulační orgány stanovily přísné limity příjmu nitrosaminů, přičemž pro NTTP platí 37 ng/den. Vysoce citlivé analytické metody umožňují udržet obsah NTTP pod limitem a zajistit dostupnost léků.

Cíle a přehled studie

Cílem application note bylo vyvinout a ověřit spolehlivou, selektivní a citlivou LC-MS/MS metodu pro stanovení N-nitrosositagliptinové nečistoty v kombinovaném tabletovém přípravku se sitagliptinem a metforminem. Metoda je založena na MRM režimu na trojitě kvadrupólovém spektrometru Agilent 6475 a vysokotlaké kapalinové chromatografii Agilent 1290 Infinity II.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump, Multisampler a Thermostat
• Detektor: Agilent 1290 Infinity II Variable Wavelength Detector
• MS: Agilent 6475 triple quadrupole (APCI ionizace)
• Chromatografická kolona: biphenylový sloupec 4,6×150 mm, částice 2,7 μm

Použitá metodika

Vzorky se extrahovaly methanolem za optimálních podmínek (vortex, Rotospin, centrifugace, filtrace). Pro kalibraci byly připraveny pracovní standardy v rozmezí 0,04–1,3 ng/mL (0,013–0,43 ppm). Chromatografické podmínky zahrnovaly gradient s mobilními fázemi 0,1 % kyseliny mravčí ve vodě a v methanolu, průtok 0,5 mL/min při 50 °C. Časový diverter odvádí hlavní API mimo MS během eluce sitagliptinu a metforminu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Vynikající linearitu (R2 > 0,99) v celém rozsahu kalibrace 0,04–1,3 ng/mL
• Limit detekce LOD 0,008 ng/mL (S/N > 30:1)
• Dolní kvantifikační mez LLOQ 0,04 ng/mL (S/N > 300:1) a LOQ 0,088 ng/mL (S/N > 600:1)
• Precizitu (RSD < 5 % při LLOQ, LOQ a specifikačním limitu 1,1 ng/mL)
• Akurátnost (obnova 80–120 % při specifikačním limitu)

Separace NTTP od sitagliptinu a metforminu byla optimalizována volbou biphenylové kolony a gradientu s methanolem, což zajistilo vysokou selektivitu a citlivost.

Přínosy a praktické využití metody

Díky vysoké citlivosti a reprodukovatelnosti lze metodu použít jak ve vývoji léčiv, tak v rutinní kontrole kvality finálního produktu. Vyhovuje požadavkům EMA a FDA na kontrolu nitrosaminů v lécích a umožňuje kontinuální sledování nízkých úrovní NTTP ve výrobních šaržích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na rozšíření metody na jiné nitrosaminové nečistoty (NDSRI) a integraci vysokoobjemových automatizovaných řešení pro screening. Vznikají perspektivy pro aplikaci v on-line procesu monitoringu a v kombinaci s vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrií pro širší spektrum mutagenních nečistot.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na přístrojové sadě Agilent 1290/6475 splňuje vysoké nároky na citlivost, selektivitu a opakovatelnost při stanovení N-nitrosositagliptinu. Metoda podporuje bezpečnou výrobu a distribuci sitagliptinových léčiv a plní požadavky regulátorů na kontrolu nitrosaminů.

Reference

1. Burns MJ et al Revisiting the Landscape of Potential Small and Drug Substance Related Nitrosamines in Pharmaceuticals J Pharm Sci 2023 112(12) 3005-3011
2. FDA Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities Guidance for Industry CDER August 2023
3. EMA Questions and Answers on Nitrosamine Impurities in Human Medicinal Products EMA/409815/2020
4. FDA Guidance Development and Validation of a RapidFire-MS/MS Method for Screening of Nitrosamine Impurities
5. FDA Method LC-HRMS for Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Drug Product
6. Mani C Banerjee S Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS Agilent Technologies 5994-1383EN 2019
7. Covert K How to Catch a Potential Mutagenic Impurity Agilent Technologies 5994-0864EN 2019
8. FDA Guidance LC-HRMS Method for Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs