Drug to Antibody Ratio Analysis of Brentuximab Vedotin in Monkey Plasma

Význam tématu

Analýza poměru nálož-léčivo (DAR) pro konjugáty protilátek a léčiv (ADC) je zásadní pro pochopení farmakokinetiky, stability a biologické účinnosti těchto komplexních terapeutik. Přesné stanovení počtu konjugovaných cytotoxických molekul na molekulu protilátky přímo ovlivňuje bezpečnost a účinnost léku v klinických aplikacích.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo navrhnout a ověřit plně automatizovaný hybridní postup kombinující ligand binding assay (LBA) a kapalnou chromatografii s hmotnostní spektrometrií (LC/Q-TOF) pro stanovení DAR brentuximabu vedotinu v primátí plazmě pod nativními podmínkami. Workflow využívá platformu AssayMAP Bravo, Agilent 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF.

Použitá metodika a instrumentace

Procedura zahrnovala imunoadsorpci ADC pomocí biotinylované anti-human Fc protilátky navázané na streptavidinové kartridge v automatizovaném systému AssayMAP Bravo. Po očistě byl intactní ADC eluován za mírných podmínek a separován pomocí velikostně vylučovací chromatografie na koloně Agilent Bio SEC-3 (4.6×150 mm, 3 µm) při 25 °C s mobilem 100 mM octanem amonným (pH 7) isokraticky 0.4 mL/min. Detekce probíhala na Agilent AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF v pozitivním režimu elektrospray s optimalizovanými parametry. Data byla zpracována softwarem MassHunter BioConfirm.

Hlavní výsledky a diskuse

Spektrum intactního ADC pod nativními podmínkami vykazovalo centrální nábojový obal kolem m/z 5804. Dekonvoluce ukázala hlavní klony DAR 2, DAR 4 a DAR 0 s průměrným DAR 2.53. V testu stability v plazmě při 37 °C poklesl průměrný DAR z 2.49 dne 0 na 1.80 po 1 dnu a dále na 1.30 po 3 dnech, přičemž od 3. do 7. dne se hodnota stabilizovala kolem 1.23. Ve vzorcích se objevily rovněž klony DAR 1 a DAR 3, což indikuje postupné uvolňování cytotoxické nálože.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaný hybridní přístup zajišťuje vysokou citlivost, specifitu a reprodukovatelnost při minimálním vývojovém čase metody. Postup je univerzálně aplikovatelný na různé ADC a další velké biopolymerní protilátky, podporuje vývoj a kontrolu kvality nových terapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření automatizace a integrace s vysokopropustnými platformami, adaptace metodiky pro multiplexní analýzy různých ADC a využití pokročilých datových algoritmů pro přesnější dekonvoluci a kvantifikaci ve složitých biologických maticích.

Závěr

Použití Agilent AssayMAP Bravo, 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF představuje efektivní řešení pro stanovení DAR pod nativními podmínkami v biologické matrici. Navržený workflow usnadňuje vývoj a validaci metod pro ADC R&D a QC procesy.

Reference

• Global Market Insights. Antibody Drug Conjugates Market Report, 2023.
• Jenkins R.; Duggan J.; Aubry A.-F. et al. Recommendations for Validation of LC–MS/MS Bioanalytical Methods for Protein Biotherapeutics. AAPS J. 2015, 17(1), 1–16.
• DailyMed: Adcetris (Brentuximab Vedotin) Prescribing Information, 2018.
• European Medicines Agency: Adcetris EPAR, 2018.