LC-MS/MS ANALYSIS OF MABS USING A MONOCLONAL ANTIBODIES QUANTIFICATION KIT – SPOTLIGHT ON INFLIXIMAB

Význam tématu

Monoklonální protilátky (mAbs) představují klíčový nástroj v personalizované medicíně, zejména v monitorování a optimalizaci dávek protizánětlivých léčiv, jako je infliximab. Tradiční ligandově navázané testy (LBA) sice poskytují stanovení koncentrace mAbs, avšak narážejí na omezený dynamický rozsah, vysoké náklady a možnost křížové reaktivity. LC-MS/MS jako alternativa kombinuje vysokou analytickou citlivost, selektivitu a široký dynamický rozsah, což zvyšuje spolehlivost a flexibilitu kvantifikace terapeutických protilátek.

Cíle a přehled studie

Úloha studie spočívala ve validaci jednoduchého a rychlého protokolu pro kvantifikaci infliximabu v lidské plasmě pomocí komerčního kitu mAbXmise a LC-MS/MS. Testy byly provedeny na dvou typech hmotnostních spektrometrů (Xevo TQ-XS a Xevo TQ-S micro) za účelem posouzení lineárního rozsahu, přesnosti a reprodukovatelnosti měření.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky (20 µl plazmy) byly připraveny podle protokolu mAbXmise: imunokaptura protilátky, praní, eluční krok a sušení. Následovalo přesné odbourání proteázou CutXmise během noci a příprava na analýzu.

• Chromatografie: ACQUITY UPLC I-Class FL se sloupcem XSelect Premier HSS T3 (2,1×50 mm, 2,5 µm), gradient acetonitril/voda/kyselina formová, doba analýzy 4,5 minuty.
• Hmotnostní spektrometrie: Xevo TQ-XS a Xevo TQ-S micro v režimu MRM, cílená analýza tryptických peptidů infliximabu se stabilně značenými interními standardy.
• Kit mAbXmise: kalibrátory 2–100 µg/mL, QC na 4 a 25 µg/mL, imunokaptura v PuriXmise destičkách.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrační křivky pro peptideské signatury vykázaly koeficient determinace r2 > 0,998. Citlivost byla nejvyšší pro peptid SIN a poté ASQ při nejnižší koncentraci 2 µg/mL. Celková přesnost (CV ≤ 9,5 %) a správnost 95–108 % potvrdily spolehlivost metody.
V šesti individuálních plazmatických vzorcích byla ověřena odolnost proti matricovým efektům, přičemž variabilita do 10 % CV po vyloučení peptidu SIN (náchylného k deamidaci). V sadě 29 anonymizovaných vzorků byla vykázána reprodukovatelnost peptidů s průměrným CV 10 % při systematickém vyloučení problematického peptidu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje robustní a rychlou kvantifikaci infliximabu s nízkou spotřebou vzorku a reagentů. Komerční kit zjednodušuje rutinní workflow, minimalizuje matricové interferující látky a je kompatibilní s manuální i plně automatizovanou přípravou.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření sady mAbXmise na další terapeutické protilátky, plná automatizace přípravy vzorků a integrace do klinické rutiny pro terapeutické monitorování. Další vývoj bude směřovat k identifikaci stabilních signature peptidů odolných úpravám a rozšíření dynamického rozsahu detekce.

Závěr

Kombinace LC-MS/MS a komerčního kitu mAbXmise představuje efektivní a flexibilní přístup ke kvantifikaci infliximabu v plasmě, překonávající omezení klasických imunotestů. Metoda nabízí vysokou citlivost, přesnost a možnost automatizace, což ji činí vhodnou pro klinické a farmaceutické aplikace.

Reference

• Foley D., Vukovic J., Lebert D., Calton L.J. LC-MS/MS Analysis of mAbs Using a Monoclonal Antibodies Quantification Kit – Spotlight on Infliximab. Waters Corporation; 2024.