Enhanced Metabolite Profiling from Bark of Alangium Salviifolium Using LC/MS and GC/Q-TOF Techniques

Význam tématu

Analytická charakterizace metabolitů léčivých rostlin je klíčová pro pochopení terapeutických účinků tradičních přípravků. Použití pokročilých separačních a detekčních metod umožňuje komplexní průzkum metabolomu a objev nových bioaktivních sloučenin.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vytvoření komplexního pracovní postupu pro profilování metabolitů kůry Alangium salviifolium. Metoda kombinovala dvoufázovou extrakci, frakcionaci pomocí Agilent 1260 a analýzu frakcí LC MS a GC Q TOF za účelem maximalizace detekčního pokrytí.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Analytical Scale Fraction Collection System
• Agilent 1260 Infinity LC a 6540 Accurate Mass Q TOF LC MS
• Agilent 7200 GC Q TOF s DB 5ms kolonou
• LC kolony Poroshell HILIC Plus ZORBAX RRHD SB Aq Eclipse Plus C18 a Phenyl Hexyl
• MassHunter Qualitative Analysis MassHunter MSC MassProfiler Professional

Použitá metodika

Borka byla za studena mleta v tekutém dusíku a extrahována chloroform metanol vodou v poměru 1 2 5. Frakce z vodné i organické fáze byly shromažďovány do 96jídel sušeny a resuspendovány v mobilních fázích. LC MS analýza probíhala na čtyřech kolónách v pozitivním i negativním ionizačním režimu. Pro GC je provedena derivatizace a retenční časové zámčení s interním standardem dle Fiehn metody.

Hlavní výsledky a diskuse

Celkem bylo detekováno 1016 metabolitů z nichž bylo identifikováno 511 pomocí METLIN MSC a knihoven Fiehn Wiley NIST. LC MS/MS odhalila 449 sloučenin GC Q TOF 62 sloučenin. Literatura potvrdila že 81 identifikovaných látek má terapeutické účinky jako antiproliferační antimikrobiální a antioxidační. Ortogonální kolony a dualní ionizace poskytly jedinečný profil pro různé třídy metabolitů.

Přínosy a praktické využití metody

Navržený postup umožňuje široké pokrytí metabolitů zvyšuje šanci objevu nových bioaktivních sloučenin a je aplikovatelný na další přírodní matrice v objevování léčivých látek.

Budoucí trendy a možnosti využití

Zavádění plně automatizovaných frakčních systémů rozšíření knihoven spektroskopických databází integrace s bioinformatickými nástroji a multiomickými přístupy pro hlubší charakterizaci metabolomů.

Závěr

Komplexní workflow zahrnující dvoufázovou extrakci frakcionaci a kombinaci LC MS MS s GC Q TOF přineslo široké spektrum detekovaných metabolitů v kůře Alangium salviifolium. Tento přístup zvyšuje analytickou citlivost a nabízí nové možnosti v přírodovědném výzkumu a farmaceutickém průmyslu.

Reference

1. Hung T M et al Phenolic glycosides from Alangium salviifolium leaves with inhibitory activity on LPS induced NO PGE2 and TNF a production Bioorg Med Chem Lett 2009 19 4389 4393
2. Anjum A et al Antibacterial compounds from the flowers of Alangium salviifolium Fitoterapia 2002 73 526 528
3. Sharma A K et al Antidiabetic effect of bark of Alangium salvifolium in alloxan induced diabetic rats J Global Pharma Tech 2011 3 4 26 32
4. Murugan V et al Antifertility activity of the stem bark of Alangium salviifolium in wistar female rats Indian J Pharmacol 2000 32 388 389
5. Commisso M et al Untargeted metabolomics an emerging approach to determine the composition of herbal products Comput Struct Biotechnol J 2013 4 5 e201301007
6. Palazoglu M Fiehn O Metabolite Identification in Blood Plasma Using GC MS and the Agilent Fiehn GC MS Metabolomics RTL Library Agilent Tech Application Note 2009 5990 3638EN
7. Aurand C R et al Metabolomic Profiling of Neurospora crassa Fungi Using HILIC and Reversed Phase LC MS Report Analytical Sci 2014 56 13 14