Micro Volume Quantitation Measurement of Nucleic Acid using Nano Stick with UV-1280

Význam tématu

Ultrafialově viditelná spektrofotometrie umožňuje rychlou a přesnou kvantifikaci nukleových kyselin v extrémně malých objemech vzorku, což je zásadní v molekulárně biologických a QA/QC aplikacích, kde je k dispozici pouze několik mikrolitrů roztoku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit schopnost měření koncentrace DNA v mikro objemu (2–3 µl) pomocí mikrolitrové kyvety SINCO Nano Stick ve spojení se spektrofotometrem Shimadzu UV-1280 a prokázat linearitu, přesnost a reprodukovatelnost metody.

Použitá instrumentace

• Spektrofotometr Shimadzu UV-1280
• Microlitrová kyveta SINCO Nano Stick (0,5 mm optická dráha)
• Calf thymus DNA standard 1 mg/ml (SIGMA-ALDRICH)
• TE pufr (pH 8,0) od Nacalai Tesque

Použitá metodika

Vzorek DNA byl ředěn v TE pufru na koncentrace od 25 do 1000 ng/µl. Pro měření se pipetovalo 3 µl vzorku do Nano Stick, kontrolovalo se přítomnost bublinek a provedla se korekce nuly s TE pufrem. Spektra byla zaznamenána v režimu Spectrum (220–350 nm, střední rychlost skenu, krok 1 nm, štěrbina 5 nm). Koncentrace 500 ng/µl byla dále desetkrát měřena v režimu DNA Quantitation při vlnové délce 260 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Absorpční spektra DNA ukázala charakteristický vrchol při 260 nm úměrný koncentraci a minimální signál kolem 320 nm. Kalibrační křivka vykázala lineární rozsah až do 1000 ng/µl s korelačním koeficientem r2 = 0,9995. Deset opakovaných měření vzorku o koncentraci 500 ng/µl přineslo průměrnou absorbanci 0,451, směrodatnou odchylku 0,006 a relativní odchylku 1,32 %, což potvrzuje vysokou reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda minimalizuje spotřebu vzorku, zjednodušuje manipulaci a čištění, poskytuje široký lineární rozsah a vynikající opakovatelnost. Je ideální pro molekulárně biologické laboratoře, QC procesy a další analytické aplikace vyžadující rychlou a spolehlivou mikrovolumetrickou kvantifikaci nukleových kyselin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření do plně automatizovaných platforem, integrace s laboratorními informačními systémy (LIMS), aplikace na stanovení proteinů, vícevlnové a vysoce propustné měřicí režimy, a dále miniaturizace a mobilní spektrofotometry pro on-site analýzu.

Závěr

SINCO Nano Stick ve spojení se spektrofotometrem Shimadzu UV-1280 představuje efektivní systém pro mikrovolumetrickou kvantifikaci nukleových kyselin. Nabízí vysokou přesnost, minimální spotřebu vzorku a široký lineární rozsah, což jej činí vhodným pro široké spektrum bioanalytických i průmyslových aplikací.

Reference

• Shimadzu Corporation Application Note AD-0097 Micro Volume Quantitation Measurement of Nucleic Acid using Nano Stick with UV-1280 2015