Quantitation of Nucleic Acids – Trace Measurement Using TrayCell and Nano Stick –

Význam tématu

Ultrafialovo-viditelná spektrofotometrie je klíčová pro stanovení nukleových kyselin v malém objemu vzorku. S rostoucími požadavky na analýzu stopových hladin se mikroobjemové metody stávají nezbytnými v oblasti molekulární biologie, biotechnologie a kvalitativní kontroly.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit přesnost a opakovatelnost kvantifikace lambda DNA pomocí spektrofotometru Shimadzu UV-1900 se dvěma typy mikro buněk TrayCellTM a Nano Stick. Testováni byli standardní roztoky DNA i vzorek neznámé koncentrace.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu byly použity standardní roztoky lambda DNA s koncentracemi od 27,5 do 440 ng μl a vzorek izolovaný srážením v ethanolu. Měření probíhalo při vlnové délce 260 nm pro kalibrační křivku a v rozsahu 220 až 330 nm pro sledování spekter. Veškerá měření se realizovala na přístroji Shimadzu UV-1900 vybaveném režimem Biomethod Mode. Mikro buňky:

• TrayCell s optickou délkou 1,0 mm, objem vzorku 4 μl
• Nano Stick s optickou délkou 0,5 mm, objem vzorku 3 μl

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka získaná pomocí TrayCell měla sklon 0,0021 jednotky absorbance na koncentraci a koeficient determinace 0,9999. U Nano Stick byl sklon 0,0010 a stejný koeficient determinace. Neznámý vzorek vykázal koncentrace 373 ng μl (TrayCell, trojnásobně naředěný) a 1066 ng μl (Nano Stick bez ředění). Opakovatelnost 10 měření standardu 440 ng μl pro TrayCell i Nano Stick byla potvrzena CV kolem 0,4 %, což svědčí o vysoké přesnosti analýzy mikro objemů.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metoda umožňuje rychlou a přesnou kvantifikaci stopových množství nukleových kyselin s minimální spotřebou vzorku. Biomethod Mode navíc nabízí jednoduché vyhodnocení poměru absorbancí, koncentrace DNA i bílkovin v jednom kroku. Metoda nachází uplatnění v molekulární diagnostice, výzkumu genetických markerů a QA QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další miniaturizace mikro buněk a integrace spektrofotometrů do automatizovaných pracovních postupů. Vývoj nových povrchově modifikovaných mikro buněk či rozšíření biomethod protokolů může zlepšit citlivost a rozšířit aplikace do oblasti rychlého skríningu a on site analýz.

Závěr

Shimadzu UV-1900 ve spojení s mikro buňkami TrayCell a Nano Stick poskytuje robustní nástroj pro přesnou kvantifikaci nukleových kyselin v malém objemu. Kombinace vysoké lineární závislosti, nízkého koeficientu variace a uživatelsky přívětivého rozhraní podporuje široké využití v laboratořích s omezeným množstvím vzorku.

Reference

• K Sobue Quantitation of Nucleic Acids Trace Measurement Using TrayCell and Nano Stick Shimadzu Application Note LAAN A UV E072 First Edition May 2018