LIQUID CHROMATOGRAPHIC GRADIENT METHOD ALLOWANCES PROVIDED BY GENERAL CHAPTER, USP CHROMATOGRAPHY <621>

Význam tématu

Monografické metody kapalné chromatografie hrají klíčovou roli v kontrole kvality léčiv a harmonizace podle USP <621> umožňuje adaptaci metod na moderní LC platformy, což vede k rychlejším, úspornějším a reprodukovatelnějším analýzám.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo aplikovat doporučení USP General Chapter <621> k modernizaci monografické metody pro separaci impurit antivirového léku abacavir sulfátu, zachovat kritéria system suitability a vyhodnotit přínosy přechodu na UHPLC.

Použitá metodika a instrumentace

• Výpočet úprav průtoku a objemu injekce pro udržení lineární rychlosti (Equation 1)
• Korekce počátečního času gradientu pro zachování poměru gradient slope k objemu (Equation 2)
• Dodatečná kompenzace za objem mezičasu (dwell volume) při přechodu z HPLC na UHPLC (Equation 3)
• Ověření výpočtů pomocí Waters Preparative OBD Column Calculator a Columns Calculator 2.0

Použitá instrumentace

• Waters Alliance™ iS HPLC/UHPLC systémy
• Empower™ 3 Chromatography Data System
• Symmetry C18, XBridge BEH C18, XSelect HSS T3 kolony různých rozměrů a pórů

Hlavní výsledky a diskuse

• Dosahované rozlišení NLT 1.5 pro kritickou dvojici impurit (abacavir a trans-abacavir sulfát) po aplikaci metodických úprav
• Shodné relativní retenční časy pro kolony se stejnými L1 substituenty
• Absence píkových inverzí či kolizí při optimalizovaných parametrech

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby mobilní fáze a vzorku
• Zvýšení počtu analýz za jednotku času
• Možnost snadné implementace moderních LC platforem bez újmy na kritériích kvality

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozvoj online kalkulačních nástrojů a jejich integrace do CD systémů
• Aplikace modernizace metod u dalších monografií a komplexních matric
• Optimalizace nových stacionárních fází a vztahů L/dp pro vyšší účinnost

Závěr

Implementace doporučení USP <621> pro gradientní LC umožňuje hladký přechod z HPLC na UHPLC, zachování monografických standardů a přináší významné operativní a ekologické úspory v analytické praxi.

Reference

1. Layton CE, Rainville PD. Achieving Method Modernization with the New Liquid Chromatographic Gradient Allowances Provided by USP General Chapter <621>, Waters Corporation, 2023.
2. USP General Chapter <621> Chromatography, Official Date: 01-Dec-2022.
3. Abacavir Sulfate Monograph, USP 01-May-2020.
4. Waters Preparative OBD Column Calculator, Waters.com, 2023.
5. Columns Calculator 2.0, Waters.com, 2023.