Quantitative Analysis of Opiates in Urine Using RRHT LC/MS/MS

Význam tématu

Sledování opiátů v biologických vzorcích je zásadní pro klinickou diagnostiku, monitorování terapie, forenzní analýzy a testování na přítomnost omamných látek. Urinální matice nabízí snadnou dostupnost vzorků a dostatečný objem pro analýzy. Vysoce přesná a citlivá metoda umožňuje spolehlivě detekovat nízké koncentrace a potvrdit přítomnost opiátů nad stanovenými prahovými hodnotami.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, vysoce průchodnou a citlivou metodu kvantifikace a potvrzení sedmi klíčových opiátů a jejich interních standardů v moči. Metoda využívá rychlou chromatografii RRHT LC a detekci v režimu více reakčního monitorování MRM na triple kvadrupólovém hmotnostním spektrometru s potvrzením poměru kvantifikátor/kalifikátor produktových iontů.

Použitá instrumentace

• HPLC: Agilent 1200 Series pumpa, odvzdušňovač, autosampler, termostatovaný sloupcový modul
• Kolona: ZORBAX SB-C18 2.1×50 mm, 1.8 µm, teplota 50 °C
• MS: Agilent 6410 Triple Quadrupole, ESI v pozitivním módu

Použitá metodika

Vzorky moči byly enzymaticky hydrolyzovány glukuronidázou a extrahovány v acetátovém pufru. Následovala injekce 5 µl na LC kolonu a gradientní eluce ve vodě a acetonitrilu bez modifikátorů. Detekce v režimu MRM sledovala kvantifikační a potvrzovací ionty s tolerancí poměru ±20 %. Optimalizace fragmentačního napětí a kolizní energie zajišťovala maximální citlivost.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah od 1 do 150 pg/µl v moči (0.067–10 pg/µl pro 6-MAM) s koeficienty R2 nad 0.99. Limity detekce dosažené S/N≥3 byly nižší než 1 pg on-column pro většinu sloučenin (49 fg pro 6-MAM). Potvrzení přítomnosti opiátů splňovalo požadavky na poměr kvantifikátor/kalifikátor i na nejnižších úrovních.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje současné kvantitativní stanovení a potvrzení přítomnosti opiátů v jediném běhu pod 3.5 minuty, s celkovou dobou cyklu 8 minut. Vysoká přesnost, rychlost a robustnost činí tuto analýzu vhodnou pro forenzní, klinické i pracovní testování.

Budoucí trendy a možnosti využití

Předpokládá se rozšíření na další metabolity a narkotika, implementace automatizovaných workflow a využití vysoko rozlišovací hmotnostní spektrometrie pro zvýšení specificity. Rozvoj miniaturizace a vylepšení datové analýzy dále zefektivní rutinní testování.

Závěr

Vyvinutá RRHT LC/MS/MS metoda s MRM režimem na triple kvadrupólu nabízí rychlou, citlivou a spolehlivou analýzu opiátů v moči. Vysoká linearita, nízké LOD a integrované potvrzení poměrem iontů splňují požadavky klinických a forenzních laboratoří.

Reference

• Sheher Mohsin a kol Quantitative Analysis of Opiates in Urine Using RRHT LC/MS/MS Agilent Technologies Application Note 5989-7213EN 2007