Determination of Main and Trace Enantiomers in One Run Using the Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer System

Význam tématu

Chiralita hraje klíčovou roli v oblasti farmaceutik, protože enantiomery mohou vykazovat rozdílné farmakologické účinky a bezpečnostní profily. Přesné rozlišení a kvantifikace jednotlivých enantiomerů je proto nezbytnou součástí vývoje a kontroly kvality léčiv.

Cíle a přehled studie

Studie demonstruje aplikaci systému Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer pro současné stanovení hlavního (S-(–)-propranololu) a stopového enantiomeru (R-(+)-propranololu) v jediné chromatografické běhu. Cílem bylo dosáhnout vysoké citlivosti pro stopové složky a širokého lineárního rozsahu pro hlavní složku bez nutnosti více injekcí.

Použitá metodika

Metoda využívá vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii s chirálním stacionárním fázovým činidlem (YMC Chiral Cellulose-C, 250×4,6 mm, 5 μm). Pohyblivá fáze je tvořena směsí n-hexanu/2-propanolu/diethylaminu (80/20/0,1) isokraticky při 1 mL/min a 25 °C. Detekce probíhá při 230 nm (ref. 400 nm) rychlostí 10 Hz. Injekční objem je 5 μL při teplotě vzorku 10 °C. Vzorky S-(–)-propranololu a R-(+)-propranololu byly připraveny v ethanolu v koncentracích umožňujících stanovení LOD i kvantifikace hlavní složky.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity DAD s kyvetou 60 mm (G4212A)
• Agilent 1290 Infinity DAD s kyvetou 3,7 mm (G4212A)
• Agilent 1200 Infinity HDR-DAD Solution Kit (G2199AA)
• Agilent 1290 Infinity termostatovaná kolona (G1316C)
• Agilent 1290 Infinity autosampler (G4226A)
• Agilent 1290 Infinity termostat (G1330B)
• Agilent 1290 Infinity binární pumpa (G4220A)
• Software Agilent OpenLAB CDS ChemStation Edition A.02.01

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah pro S-propranolol od 17,12 do 10 700 ng s korelačním koeficientem 0,99996. Mez detekce (LOD) dosáhla 2,34 ng pro R-enantiomer a 3,64 ng pro S-enantiomer (S/N = 3). Precision retence a plochy byla vysoká (RSD ~0,1 % retencí, 0,25–0,64 % ploch). Enantiomerní přebytek (ee) S-enantiomeru byl stanoven na 99,87 % v jediné injekci.

Přínosy a praktické využití metody

• Současné kvantifikace hlavního a stopového enantiomeru v jedné analýze
• Široký lineární rozsah až 6 000 mAU a vysoká citlivost pod 1 mAU
• Úspora času a spotřeby vzorku díky jediné injekci
• Uplatnění ve vývoji a QC chiralitních léčiv

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může spočívat v integraci HDR-DAD s hmotnostní spektrometrií pro detailní identifikaci enantiomerů, automatizaci přípravy vzorků a rozšíření metody na další chirální farmaceutické sloučeniny či environmentální monitoring.

Závěr

Použití Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer umožňuje rychlé, citlivé a spolehlivé stanovení hlavního i stopového enantiomeru v jediné chromatografické běhu. Široký dynamický rozsah a nízké LOD zefektivňují vývoj a kontrolu kvality chirálních léčiv.

Reference

• 1. US Food and Drug Administration. Development of New Stereoisomeric Drug: Guidances, 1992.
• 2. IUPAC. Compendium of Chemical Terminology, 2nd ed., 1997.
• 3. Huesgen A.G. Comparison of sensitivity and linearity of the Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Solution and conventional Agilent 1290 Infinity DAD. Agilent Technologies, 2013.
• 4. Sigma-Aldrich. Product information: HLD/RXR 12/02, 2014.