Determination of Log P for Compounds of Different Polarity Using the Agilent 1200 Infinity Series HDR‑DAD Impurity Analyzer System

Význam tématu

Stanovení koeficientu rozdělení log P mezi oktanol a vodu je klíčové pro hodnocení lipofilicity léčiv a předpověď absorpce, distribuce, metabolizmu a vylučování látek v organismu. Metoda umožňuje optimalizovat farmakokinetické vlastnosti a zvýšit úspěšnost vývoje nových léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ukázat, že Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer System poskytuje dostatečně široký lineární rozsah (až 6000 mAU) a vysokou citlivost (detekce pod 0,5 mAU) pro simultánní kvantifikaci velmi nízkých i velmi vysokých koncentrací v rámci stanovení log P u různých farmaceutických sloučenin.

Použitá instrumentace

• Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer System
• Agilent 1290 Infinity DAD s 60 mm kyvetou (G4212A)
• Agilent 1290 Infinity DAD s 3,7 mm kyvetou (G4212A)
• Agilent High Dynamic Range DAD Solution Kit (G2199AA)
• Agilent 1290 Infinity Thermostated Column Compartment (G1316C)
• Agilent 1290 Infinity Autosampler (G4226A)
• Agilent 1290 Infinity Thermostat (G1330B)
• Agilent 1290 Infinity Quaternary Pump (G4204A)

Použitá metodika

Vzorky (testosteron, paracetamol, ibuprofen, pindolol) byly připraveny ve vodné fázi (pH 7,4) a nasycené oktanolu a naopak. Po 24 hodinách fáze odděleny a vzorky analyzovány chromatograficky s C18 kolonou ZORBAX RRHD Eclipse Plus (4,6×50 mm, 3,5 μm) při 30 °C, průtoku 1 mL/min a detekci při 230 nm. Kalibrace proběhla šesti úrovněmi od 0,874 ng do 13 663 ng injikovaného množství.

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity kalibrace pro všechny sloučeniny vykázala korelační koeficienty ≥0,9995 a umožnila detekovat rozsah injikovaného množství od <1 ng až po >13 000 ng bez nutnosti změny objemu injekce. Distribuce fáze odhalila log P 3,28 pro testosteron, 1,27 pro ibuprofen, 0,11 pro paracetamol a –0,28 pro pindolol, v dobré shodě s literaturou.

Přínosy a praktické využití metody

Vysoký dynamický rozsah a nízký šum HDR-DAD umožňují přesné stanovení log P v jediném běhu bez víceobjemových injekcí. Metoda je efektivní, rychlá (10 min běh + 3 min reequilibrace) a vhodná pro rutinní screening lipofilicity ve farmaceutickém výzkumu a QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření HDR-DAD modulu na další druhy analytických sloučenin, integrace s automatizovanými platformami a aplikace pH variabilních rozpouštědel pro komplexní hodnocení ionizovatelných látek. Možné je také využití pro screening metabolit a toxikologické studie.

Závěr

Agilent 1200 Infinity Series HDR-DAD Impurity Analyzer System prokázal spolehlivou kvantifikaci širokého spektra koncentrací a přesné stanovení log P u různých farmaceutických sloučenin, čímž přispívá k efektivnímu návrhu léčiv.

Reference

1. Wikipedia. Partition Coefficient. http://en.wikipedia.org/wiki/Partition_coefficient (accessed February 10, 2014).
2. Cairns D. Essentials of Pharmaceutical Chemistry, 4th Edition, 2012.
3. US EPA. Prevention, Pesticides and Toxic Substances, EPA 712–C–96–038, August 1996.
4. Huesgen AG. Comparison of sensitivity and linearity of HDR-DAD and conventional DAD, Agilent Technologies Application Note 5991-1890EN, 2013.
5. Kerns EH et al. Pharmaceutical profiling method for lipophilicity and integrity using LC-MS, J Chromatography B, 2003, 791:381–388.