Comparison of therapeutic antibody originator and biosimilar glycosylation using an integrated glycan labeling solution

Význam tématu

Glykozylace monoklonálních protilátek ovlivňuje jejich účinnost, toxicitu a imunogenicitu. Precizní sledování N-glykanů je klíčové pro kontrolu kvality při vývoji a výrobě biosimilárních léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit robustnost a spolehlivost balíčku GlycanAssure HyPerformance APTS ve spojení se systémem Vanquish Flex a amido HILIC kolonkou Accucore 150 při srovnání glykoformací originátoru Remicade a biosimiláru Inflectra. K analýze byl použit dextranový žebřík pro přiřazení hodnot glukózových jednotek (GU).

Použitá metodika a instrumentace

• Denaturace, uvolnění N-glykanů s PNGase F, štítkování APTS a čistění na magnetických kuličkách.
• Separační metoda HILIC na Thermo Accucore 150 Amide HILIC kolonce (2,6 μm, 2,1×150 mm) s mobilní fází acetonitril/ammonium formiát pH 4,4.
• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Flex Binary UHPLC se SmartInject pro přesnou gradientní eluci.
• Detekce: Vanquish Flex Fluorescence Detector (Ex 455 nm / Em 500 nm).
• Software: Chromeleon 7.2.5 pro sběr dat, kvantifikaci a stanovení GU pomocí pátého řádu polynomu.

Hlavní výsledky a diskuse

Příprava vzorku pro čtyři repliky originátoru, biosimiláru a NIST mAb standardu proběhla za méně než 1,5 h s vysokou opakovatelností. U NIST mAb bylo detekováno 38 vrcholů, z nich 29 s relativním podílem nad 0,85 % a RSD retence i plochy pod 0,2 % resp. 5 %. GU kalibrace umožnila přesné přiřazení glykanových struktur. Porovnání Remicade vs. Inflectra odhalilo 37 glykoform s odchylkami v relativních podílech (vrcholy 4, 5, 15, 17 vyšší u originátoru; 8, 9, 13, 18, 20 vyšší u biosimiláru), což odpovídá rozdílům výrobních procesů v rámci regulačních limitů EMA.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá glykoanalýza s minimalizovanou přípravou vzorku bez výměny pufru.
• Výjimečná přesnost retence a relativních ploch podporuje kontrolu kvality.
• Metoda je přenosná pro široké spektrum mAb a bioterapeutik.
• Integrovaný SST zvyšuje spolehlivost výsledků a usnadňuje plnění EMA/ICH požadavků.

Budoucí trendy a možnosti využití

S nástupem komplikovanějších glykovaných proteinů se očekává rozšíření o O-glykanovou analýzu nebo middle-down MS přístupy. Další automatizace a integrace s hmotnostní spektrometrií posílí schopnost detailního glykoprofilování.

Závěr

GlycanAssure HyPerformance APTS v kombinaci s HILIC-UHPLC Vanquish Flex představuje robustní, rychlou a přesnou platformu pro charakterizaci N-glykanů monoklonálních protilátek. Metoda podporuje rutinní QC i vývoj biosimilárů v souladu s regulacemi.

Reference

• [1] EMA: Schválení mAb biosimilárů Remsima a Inflectra, 2013.
• [2] ICH Q6B: Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use.
• [3] EMA Guideline on similar biological medicinal products, 2014.
• [4] Thermo Fisher AN72443: HILIC separation of glycopeptides.
• [5] Thermo Fisher PO72275: SmartInject Technology for UHPLC precision and uptime.
• [6] Thermo Fisher TN147: GU assignment for 2-AB-labeled dextran ladder.
• [7] EMA Public Assessment Report Inflectra, 2013.