SOLAμ for pre-analysis sample concentration

Význam tématu

Ve farmakologické a toxikologické analýze je často nezbytné detekovat velmi nízké hladiny cílových látek v komplexních matricích, jako je lidská plazma. Předkoncentrace vzorku zvyšuje citlivost a minimalizuje vliv rušivých složek matrix.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit výkonnost mikro-eluce na platformě Thermo Scientific SOLAµ WAX pro rychlou a spolehlivou předkoncentraci vzorků plazmy a následnou analýzu niflumové kyseliny metodou LC-MS/MS. Studie porovnala klasické SPE s novou technologií bez nutnosti sušení a rekonstituce.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 500 µL lidské plazmy ředěné 1:1 4% H₃PO₄.
• SPE: SOLAµ WAX 96 well plate (2 mg/1 mL) – podmínění methanolem a H₃PO₄, nanesení vzorku, praní NH₄OAc (pH 4) a 70% methanolem, eluce v celkovém objemu 25 µL směsi metanol/acetonitril (50/50) s 2% amoniaku.
• Chromatografie: Dionex UltiMate 3000 RSLC s kolónou Accucore RP-MS 50 × 2,1 mm, 2,6 µm při 30 °C, tok 750 µL/min, gradient 70–10–70 % mobilních fází A (H₂O + 0,1 % FA) a B (ACN + 0,1 % FA), doba běhu 3 min.
• Detekce: MS/MS Thermo Scientific TSQ Vantage, HESI+, MRM kanály m/z 283→265 pro niflumovou kyselinu a m/z 288,8→271,1 pro deuterovaný interní standard, kolizní energie 22 V.
• Zpracování dat: LCQUAN quantitative software v2.6.

Hlavní výsledky a diskuse

Díky eluci ve 25 µL bylo dosaženo 20× koncentrace analyta oproti vstupnímu objemu 500 µL. Metoda vykázala lineární rozsah 40–40000 pg/mL s korelačním koeficientem r² = 0,998. Limit kvantifikace 40 pg/mL dosahoval signálu nad S/N > 10. Přesnost a přesnost (< RSD 2 %) byly vynikající na nízkých i vysokých QC úrovních, biologické recoveries přesahovaly 89,9 % a vliv matrix se pohyboval pod 9 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zvýšení citlivosti bez zdlouhavé evaporace a rekonstituce.
• Zkrácení workflow a minimalizace ztrát volatilních nebo adhezivních analytů.
• Vysoká reproducebilita a robustnost při nízkých objemech eluentu.
• Vhodné pro laboratorní postupy QA/QC, biofarmaceutický výzkum a klinické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření mikro-eluce na další třídy sloučenin (např. polaritu, iontové analyty), automatizace procesu v online SPE/LC systémech, integrace s vysoce propustnými platformami a využití pokročilých datových analýz k dalšímu zlepšení citlivosti a selektivity.

Závěr

SOLAµ SPE technologie umožňuje rychlou a spolehlivou předkoncentraci biologických vzorků s výrazným zvýšením citlivosti, zachováním vysoké recoverie a minimem matrix efektů. Metoda je ideální pro rutinní bioanalytické aplikace, kde je klíčová citlivost a reprodukovatelnost.

Reference

• Thermo Fisher Scientific Application Note No. 20941, 2019.