SOLAμ for pre-analysis sample concentration

Význam tématu

Pre-koncentrační příprava vzorku je klíčová v bioanalytických laboratořích pro dosažení nízkých detekčních a kvantifikačních limitů. S rostoucími požadavky na citlivost je třeba minimalizovat ztráty analytů během sušení a rekonstituce. Technologie SOLAµ SPE přináší rychlé a reprodukovatelné 20násobné soustředění vzorku bez časově náročných mezi­kroků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo demonstrovat výhody využití Thermo Scientific SOLAµ SPE pro pre-koncen­traci lidské plazmy před LC-MS/MS analýzou niflumové kyseliny. Studie porovnává klasickou SPE metodu s mikroelucí SOLAµ, sleduje linearitu, přesnost, precizi, obnovu a maticové efekty.

Použitá metodika a instrumentace

V předkládané studii byly použity tyto kroky a přístroje:

• Příprava vzorku: 500 µL lidské plazmy 1:1 zředěné 4% kyselinou fosforečnou.
• SPE pre-koncentrace: SOLAµ WAX 2 mg/1 mL 96-well destička.
  — Podmínění: 200 µL methanolu, 200 µL 4% H3PO4
  — Naložení vzorku: 0,5 mL/min
  — Promytí: 200 µL 25 mM octanu amonného (pH 4) a 200 µL 70% methanolu (pH 4)
  — Eluce: 2×12,5 µL 50:50 methanol/acetonitril s 2% amoniaku
• Chromatografie:
  — Přístroj: Dionex UltiMate 3000 RSLC
  — Kolona: Accucore RP-MS 50×2,1 mm, 2,6 µm
  — Mobilní fáze: A – voda s 0,1% kyselinou mravenčí; B – acetonitril s 0,1% kys. mravenčí, gradient 70→10→70 %A během 3 min, průtok 750 µL/min, teplota 30 °C
• MS/MS detekce:
  — Přístroj: TSQ Vantage, HESI, pozitivní ionizace
  — Podmínky: spray 3000 V, vaporizer 475 °C, kapilára 300 °C, kolize 1,5 mTorr
  — Přechody MRM: niflumic acid (283→265 m/z), IS d5 (288,8→271,1 m/z)

Hlavní výsledky a diskuse

Pomocí SOLAµ bylo dosaženo 20násobného soustředění při eluci ve 25 µL z původních 500 µL vzorku. Linearita odpovědi v rozmezí 40–40000 pg/mL vykázala r2 = 0,998. Limit kvantifikace (40 pg/mL) poskytuje signál výrazně nad šumem. Přesnost v rámci calibrační křivky se pohybovala v rozmezí −0,8 až +7,4 %, precize (RSD n=18) byla pod 1,5 %. Obnova analytu dosahovala 89,9–94,0 % a maticové efekty méně než 9 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda SOLAµ SPE přináší:

• Významné zvýšení citlivosti díky nízkému objemu eluátu a vysoké reproducibilitě.
• Eliminaci dlouhých sušení a rekonstituce, čímž se šetří čas a minimalizují ztráty volatilních či nestabilních analytů.
• Možnost práce se vzorky s omezeným objemem.
• Zlepšení stability biomolekul redukcí adsorpce na povrchu a nežádoucí solvace.

Budoucí trendy a možnosti využití

V budoucnu lze očekávat rozšíření mikroeluce SOLAµ do dalších bioanalytických aplikací, dalších typů matric a vysoce propustných výzkumných platforem. Integrace s automatizovanými vzorkovači a dálkovými řízenými systémy může dále zefektivnit workflow. Možný je i vývoj nových sorbentů pro specifické třídy látek a adaptace na UHPLC či superkritickou fluidní chromatografii.

Závěr

Studie potvrdila, že SOLAµ SPE poskytuje rychlou, reprodukovatelnou a vysoce citlivou pre-koncentraci vzorku. Dvacetkrát vyšší úroveň koncentrace bez dodatečných kroků sušení a rekonstituce zachovává přesnost, precizi i obnovu analytů.

Reference

Žádné specifické literární zdroje uvedeny.