Amino Acid Analysis of Spinach and Apple by UHPLC

Význam tématu

Analýza aminokyselin ve špenátu a jablku pomocí UHPLC přináší rychlé, citlivé a reprodukovatelné stanovení profilu aminokyselin, klíčových pro nutriční hodnocení a výzkum rostlinného metabolismu.

Cíle a přehled studie / článku

Zaměření na přenos stávající metody z Agilent 1200SL HPLC na 1290 Infinity UHPLC, optimalizaci chromatografie, aplikaci QuEChERS extrakce vzorků ovoce a zeleniny, porovnání výkonnosti, lineární rozsah, opakovatelnost a vyhodnocení aminokyselinového profilu ve špenátu a jablku.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrakce QuEChERS (AOAC 2007.01): ACN s 1% HAc, solný balíček, centrifugace, disperzní SPE
• Online derivatizace: OPA + 3-MPA pro primární AA (detekce UV 338 nm), FMOC pro sekundární AA (UV 262 nm)
• Chromatografie: Agilent 1200SL s Eclipse Plus C18 5 μm; Agilent 1290 Infinity s RRHT/RRHD ZORBAX Eclipse Plus C18 (1,8 μm a 3,5 μm)
• Přístrojové parametry: tlaky až 528 bar; průtok 0,42–0,86 mL/min; vzorkový kroužek 20–100 μL
• Detekce: UV detektor, 10 mm flow cell, štěrbina 4 nm

Hlavní výsledky a diskuse

• Doba analýzy zkrácena z ~40 min (1200SL) na 12–24 min (UHPLC) při zachování rozlišení Rs ≥2,3
• Snížení injikovaného objemu a zvýšení citlivosti
• LOQ 3–10 pmol/μL pro klíčové aminokyseliny; linearita 9–900 pmol/μL (R² ≥0,9998)
• Opakovatelnost %RSD 1,5–4,9 %
• Profil aminokyselin: jablko bohaté na asparagin, asparagovou kyselinu, alanin a GABA; špenát s vysokým obsahem asparagové a glutamové kyseliny, argininu a esenciálních AA

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a přesná stanovení aminokyselin v potravinách a rostlinách
• Praktický workflow pro QA/QC a výzkum nutričních profilů
• Využití QuEChERS pro extrakci komplexních vzorků ovoce a zeleniny

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další zkracování doby analýzy a miniaturizace metod
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro širší spektrum aminokyselin
• Automatizace přípravy i vyhodnocování dat pomocí pokročilých algoritmů
• Rozšíření metodiky na biologicky aktivní neproteogenní aminokyseliny

Závěr

Metoda derivatizace OPA/FMOC a UHPLC na platformě Agilent 1290 Infinity poskytuje výrazné zlepšení rychlosti, citlivosti i reprodukovatelnosti v porovnání s konvenčním 1200SL HPLC. QuEChERS se osvědčilo pro extrakci ze špenátu a jablka.

Reference

• Park S., Kim Y., Xu H., Boo H., Lee S. Amino Acid and GABA content in different cultivars of Momordica charantia L. Journal of Medicinal Plants Research, 3(11):897–900, 2009