Automated measurement of tacrolimus from hemaPEN dried blood spots using CLAM-203

Význam tématu

Důsledná automatizace přípravy vzorků je klíčová pro rychlou a reprodukovatelnou analýzu biologických matric. Využití mikrosamplingových zařízení, jako je hemaPEN, umožňuje méně invazivní odběr kapilární krve a podporuje časté monitorování terapeutických látek u pacientů, aniž by byl nutný tradiční odběr žilní krve.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo propojit odběr sušených kapek krve pomocí hemaPEN s plně automatizovaným modulem CLAM-2030 a dále analyzovat imunosupresivní léčivo takrolimus (TAC) na LC/MS/MS. Studie hodnotila vhodnost CLAM-2030 pro tuhé vzorky a vyhodnocovala validační parametry metody dle mezinárodních pokynů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků byly použity:

• hemaPEN a hemaPEN-QC pro odběr a sušení krve (2,74 µL na disk)
• automatický extrakční modul CLAM-2030 spojený s LCMS-8060
• kapalinová chromatografie Nexera X2 s rychlou isokratickou elucí při 60 °C (křemíková Luna Phenyl-Hexyl kolona)
• hmotnostní spektrometrie v módu ESI+, MRM akvizice stabilně značenými interními standardy (13C-D2-TAC)

Postup extrakce:

1. mechanické vytažení DBS disku do filtrečního válce
2. podmínění PTFE filtru MeOH (20 µL)
3. extrakce MeOH/H2O (80/20) se standardem (75 µL), 120 s otřes při 2000 rpm
4. 60 s vakuová filtrace a přímá injekce

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• lineární oblast 1–100 µg/L s r2 > 0,998
• intra- i inter-assay přesnosti a přesnost < 15 % (20 % pro LLOQ)
• stabilitu TAC min. 14 dní při 4 °C a 72 h při 60 °C
• průměrnou srážku 87,3 % a nulový carry-over
• minimální vliv matrice a hematokritu

Přínosy a praktické využití metody

Výhody kombinace hemaPEN a CLAM-2030:

• rychlejší a méně chybový proces přípravy vzorků
• snížení potřeby manuálních kroků v laboratoři
• komfort a bezpečí pro pacienta díky mikrosamplingu
• optimalizace workflow a lepší alokace laboratorních zdrojů
• možnost vzdáleného sběru vzorků mimo nemocniční prostředí

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje:

• rozšíření automatizované extrakce na jiné lékové analyty a biomarkery
• integraci do telemedicínských platforem pro vzdálené monitorování
• velkoplošnou klinickou validaci v reálných podmínkách
• vylepšení modulárních systémů pro různé typy pevných matric

Závěr

Studie prokázala, že plně automatizovaný modul CLAM-2030 je kompatibilní s pevným odběrem hemaPEN DBS a umožňuje přesnou, robustní a reprodukovatelnou analýzu takrolimu. Tento přístup přináší zrychlení workflow, snížení lidské chybovosti a větší flexibilitu při odběru vzorků.

Reference

1. Robin T. a kol. Automatic Quantification of Uracil and Dihydrouracil in Plasma. Journal of Chromatography B 2020, 1142, 122038.
2. Wilhelm A.J. a kol. Therapeutic Drug Monitoring by Dried Blood Spot. Clin Pharmacokinet 2014, 53(11), 961–973.
3. Uytfanghe K.V. a kol. Self-Sampling at Home Using Volumetric Absorptive Microsampling. CCLM 2021, 59(5), e185–e187.
4. Mišľanová C. a kol. Determination of Immunosuppressive Pharmaceuticals in Whole Blood. Anal Lett 2017, 50(15), 2359–2368.
5. Dayot F. a kol. DOSIMMUNE®: Fully Automated Analysis of Immunosuppressant Drugs in Whole Blood. 2022.
6. Capiau S. a kol. IATDMCT Guideline: Dried Blood Spot–Based Methods. Ther Drug Monit 2019, 41(4), 409–430.
7. Committee for Medicinal Products for Human Use. Bioanalytical method validation. EMA 2021.