A validated LC-HRAM-MS method for the rapid and confident determination of azido (AZBT) impurity in sartan drug products

Význam tématu

Sartany s tetrazolovým kruhem mohou během výroby obsahovat azidomethyl-biphenyl-tetrazol (AZBT) s mutagenními vlastnostmi. Regulace podle ICH M7 stanovuje hranici přípustného denního příjmu (1.5 µg) a požaduje citlivé a selektivní analytické metody pro kontrolu stopových úrovní mutagenních nečistot.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat jednorázovou LC-HRAM-MS metodu využívající Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 a Accucore Biphenyl kolonu pro kvantifikaci AZBT v šesti lécích sartanové skupiny (candesartan, irbesartan, losartan, olmesartan, telmisartan, valsartan). Metoda byla navržena v souladu s požadavky EDQM, USFDA Q2B, EMEA a ICH M7.

Použitá instrumentace

• Vanquish Flex Binary UHPLC
• Orbitrap Exploris 120 MS s H-ESI II ionizačním zdrojem
• Accucore Biphenyl 100 × 2.1 mm, 2.6 µm
• Chromeleon CDS verze 7.2.10

Použitá metodika

• Sample prep: extrakce 5 mg tablety v metanol–vodu (80:20), sonikace, centrifugace
• Mobilní fáze: 0.1% kyselina mravenčí ve vodě (A) a v methanolu (B)
• Gradient: 55–90% B v 6 min, návrat na 55% B do 17 min
• Flow rate 0.4 mL/min, objem injekce 5 µL, teplota kolony 35 °C
• Divert valve: flow do MS 2.4–5.2 min, jinak odvod do odpadu
• Akvizice: t-MS2, rozlišení 120000 @ m/z 200, C-trap RF 70 %, kolizní energie 5 V
• Kalibrace: lineární rozsah 0.25–40 ng/mL, LOD 0.025 ng/mL, LOQ 0.25 ng/mL
• Systémová způsobilost: %RSD oblasti <5%, kumulativní %RSD <10%

Hlavní výsledky a diskuse

• Systémová způsobilost: %RSD oblasti 0.85%, kumulativní %RSD 2.5%
• LOQ 0.25 ng/mL (2.7% RSD, S/N >240), LOD 0.025 ng/mL (S/N >25)
• Linearity R2 =0.9992, odchylka ≤±5%
• Recovery 86–124% (nízká úroveň), 92–113% (střední), 95–105% (vysoká)
• Výborné rozlišení AZBT od API analytů pomocí biphenylové kolony
• MS2 selektivita odstraňuje interferující ionty v komplexním matričním prostředí

Přínosy a praktické využití metody

• Jedna metoda pro šest sartanů
• Vysoce selektivní kvantifikace AZBT pod regulačními limity
• Robustní provoz v režimu bracketing standardů
• Snadná integrace do QA/QC workflow farmaceutických laboratoří

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorků a online diverting valve strategie
• Rozšíření na multiplexní analýzy dalších genotoxických nečistot
• Využití pokročilých HRAM instrumentů s vyšším rozlišením
• Implementace do kontinuálních výrobních procesů

Závěr

Metoda LC-HRAM-MS s Orbitrap Exploris 120 a Accucore Biphenyl kolonu prokázala vysokou citlivost, selektivitu a robustnost pro rychlou a spolehlivou detekci a kvantifikaci mutagenní AZBT nečistoty v sartanových přípravcích v souladu s mezinárodními regulacemi.

Reference

• EDQM: Risk of the presence of mutagenic azido impurities in losartan active substance
• USFDA Q2B: Validation of Analytical Procedures: Methodology, 1996
• ICH Q2(R1): Validation of Analytical Procedures, 1995
• ICH M7(R1): Assessment and control of DNA reactive (mutagenic) impurities, 2017
• Taiwan FDA method for AZBT in sartan APIs
• Swissmedic Test Method 31_PV_185 for genotoxic substances in sartans, 2021
• Jireš et al.: Determination of analogues of azidomethyl-biphenyl by LC-MS/MS, 2021