Analysis of Kakkontousing Comprehensive Two-Dimensional LC Nexera-e

Význam tématu

Kombinovaná dvoudimenzionální kapalinová chromatografie (2D-LC) umožňuje rozdělení složitých přírodních směsí s vysokou účinností rozlišení.
Díky použití různých fází a pH mobilní fáze lze analyzovat a kvantifikovat bioaktivní složky tradičních čínských drog, jako je glycyrrhizic acid v extraktech kakkonta.

Cíle studie

Cílem bylo ověřit schopnost systému Shimadzu Nexera-e pro komplexní 2D-LC oddělení a kvantifikaci glycyrrhizic acid ve standardním roztoku i ve třech komerčních extraktech kakkonta.

Použitá instrumentace

• Systém Shimadzu Nexera-e pro 2D-LC s dvěma nezávislými pumpami a kolónami.
• Semi-mikro reverzní fáze Shim-pack XR-ODSII (100×1,5 mm, 2,2 µm) pro 1D.
• Ultra rychlá reverzní fáze Shim-pack Velox C18 (50×2,1 mm, 2,7 µm) pro 2D.
• Detekce UV při 254 nm (SPD-M40).

Použitá metodika

• 1D: pH neutrální fosfátový buffer (pH 6,9) vs. acetonitril, gradient 5–30–90 % B, tok 0,05 mL/min.
• 2D: kyselý fosfátový buffer (pH 2,7) vs. acetonitril, gradienty 5–45–5 % B, tok 1,5 mL/min.
• Modulace 1 min, objem smyčky 50 µL, teplota kolony 40 °C.
• Příprava vzorků extraktů: extrakce 1,5 g granule 50 % MeOH, centrifugace, filtr 0,2 µm, injekce 2 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

• Retenční doba glycyrrhizic acid vykázala opakovatelnost 0,01 % (1D) a < 0,01 % (2D); opakovatelnost plochy signálu 3,6 % RSD.
• Kalibrační křivka v rozsahu 50–1000 mg/L měla vynikající linearitu (r2 = 0,9996).
• U tří komerčních vzorků byly naměřeny koncentrace glycyrrhizic acid: 528,7; 557,6; 982,8 mg/L (po přípravě).
• Konturové 2D chromatogramy ukázaly odlišné chemické profily jednotlivých extraktů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivou identifikaci a kvantifikaci klíčových bioaktivních látek v komplexních rostlinných přípravcích. Automatizovaná 2D-LC s auto-gradientní funkcí zkracuje dobu metody a zvyšuje reprodukovatelnost.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj spočívá ve využití více režimů separace (iontová výměna, HILIC) a integraci s hmotnostní spektrometrií pro detailní profilaci metabolitů. Pokročilá data analýza a strojové učení mohou zlepšit interpretaci komplexních dat 2D-LC.

Závěr

Studie potvrdila vysokou výkonnost Nexera-e systému pro komplexní 2D-LC analýzu kakkonta. Metoda poskytuje vynikající rozlišení, opakovatelnost a linearitu pro glycyrrhizic acid a umožňuje srovnání kvality komerčních extraktů.

Reference

• Shimadzu Corporation. High Performance Liquid Chromatograph Nexera-e Application News, First Edition: Aug. 2022.