ACQUITY UPLC I-Class SM-FL/Xevo TQ-S micro IVD System: Analytical Performance for Immunosuppressive Agents

Význam tématu

Kvantitativní analýza imunosupresivních látek v krevních vzorcích je klíčová pro optimální dávkování a prevenci nežádoucích účinků u pacientů po transplantaci. Vysoká citlivost a přesnost detekce zajišťuje spolehlivé výsledky v klinické praxi.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo ověřit analytické parametry systému ACQUITY UPLC I-Class SM-FL/Xevo TQ-S micro IVD pro simultánní stanovení cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu v plné krvi. Studie zahrnovala hodnocení linearity, detekčního limitu, opakovatelnosti a přesnosti metody.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: 50 µl plné krve vysrážené síranem zinečnatým a acetonitrilem, následná centrifugace.
• Chromatografie: kolona ACQUITY UPLC HSS C18 SB (1,8 µm, 2,1 x 30 mm), mobilní fáze A (2 mM octan amonný + 0,1% kyselina mravenčí ve vodě), B (2 mM octan amonný + 0,1% kyselina mravenčí v methanolu), gradientní eluce při průtoku 0,45 ml/min.
• Hmotnostní spektrometrie: ESI zdroj v pozitivním režimu, režim MRM, rozlišení MS1 a MS2 0,75 FWHM.

Použitá instrumentace

• Waters ACQUITY UPLC I-Class SM-FL s BSM solventním manažerem
• Waters Xevo TQ-S micro IVD Triple Quadrupole MS
• MassLynx Software v4.2 pro řízení analýzy
• TargetLynx XS Application Manager pro zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární rozsahy pro všechny analyty vykázaly koeficient determinace vyšší než 0,995. Nízké meze kvantifikace (LLOQ) byly stanoveny při S/N >10 a RSD ≤20 %. Opakovatelnost v LLOQ nepřekročila 20 %, celková přesnost a opakovatelnost QC vzorků byla v řádu jednotek procent a průměrné odchylky vůči referenčním hodnotám nepřesáhly několik procent. Chromatogram demonstroval separaci cyklosporinu při 25 ng/ml a ostatních imunosupresiv při 1 ng/ml.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a simultánní stanovení čtyř imunosupresiv umožňuje efektivní monitoring pacientů.
• Vysoká reprodukovatelnost podporuje použití v rutině klinických laboratoří.
• Integrovaný IVD systém usnadňuje validaci a zajišťuje shodu s regulačními požadavky.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky na další biologické matice jako plazmu či moč.
• Integrace s laboratorními informačními systémy pro plnou automatizaci workflow.
• Vývoj multiplexních panelů pro současné stanovení dalších imunosupresiv nebo jejich metabolitů.

Závěr

Studie potvrdila, že ACQUITY UPLC I-Class SM-FL/Xevo TQ-S micro IVD systém nabízí vysokou citlivost, přesnost a robustnost pro stanovení cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu v plné krvi. Metoda je vhodná pro klinický monitoring a farmakokinetické studie.

Reference

• Balloch S., Calton L. J., Hammond G. Analytical Performance of ACQUITY UPLC I-Class SM-FL/Xevo TQ-S micro IVD System for Immunosuppressive Agents, Waters Corporation, Application Note, červen 2022.